铜藻多糖分离纯化及其抗氧化、免疫调节活性研究

【摘要】本文主要研究从铜藻植物中提取得到的水溶性多糖，对传统提取方法进行优化，并对该多糖基本性质、体外抗氧化活性、纯化后细胞水平抗氧化活性及免疫调节能力等方面进行评价。主要研究成果如下：1.多糖提取、分离纯化及基本性质研究本章采用单因素试验与正交试验，比较水煮法、超声法、酶解法对提取率的影响，确定最优提取方案，提取率分别为：水提法4.39%；超声法提取率为3.30%；酶解法5.61%。粗多糖通过Q-SepharoseFastFlow阴离子交换柱，对铜藻粗多糖进行纯化，得三个组分，其中SHS1单糖组成主要为Man、Glu、GlcA硫酸根含量为4.48%，蛋白含量为4.71%，糖醛酸含量为0.0316μg/8μg；SHS0.5单糖组成主要为ManA、GulA，硫酸根含量为2.95%，蛋白含量为5.86%，糖醛酸含量为0.072μg/8μg；粗多糖中硫酸基多糖含量为4.94%，蛋白含量为5.95%，糖醛酸含量为1.29μg/8μg。2.SHS抗氧化活性研究本试验首先采用体外试验对粗多糖体外抗氧化活性进行研究，研究结果表明，与空白组比较，多糖具有较强的抗氧化能力，并呈剂量依赖性，当浓度为10mg/mL时，DPPH清除率达到32.3%，浓度为8mg/mL时，抗脂质过氧化能力为48.1%，浓度为10mg/mL时，超氧阴离子清除率为34.2%。同时建立双氧水诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型，研究多糖对氧化损伤细胞的保护作用。结果表明，与双氧水单独作用组比较，200μg/mLSHS1预处理12h条件下，显著提高胞内SOD和GSH-PX的活性，并显著降低胞内ROS、iNOS、LDH等因子释放量，通过RT-PCR实验可知，SHS1可显著提高Mn-SOD及GSH-Px在mRNA水平的表达，综上，多糖对双氧水诱导RAW264.7细胞氧化损伤起到保护作用，是一种有效的抗氧化剂。3.SHS对RAW264.7细胞免疫调节作用研究通过建立四个模型，分别研究多糖单独作用于细胞对免疫因子的影响、在炎症条件下对细胞免疫因子调节能力、对细胞炎症反应的保护作用及修复作用；其中多糖单独处理细胞，多糖组与空白组、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和地塞米松（dexamethasone，DEX）处理组比较，结果表明SHSC单独作用于RAW264.7细胞，显著提高TNF-α及IL-10因子水平，但与LPS组、DEX组比较差异极显著（P<0.01）；SHS1单独作用细胞，浓度为200μg/mL时，与空白组及DEX组比较，TNF-α、IL-10水平显著增加（P<0.05），但较LPS组差异显著（P<0.05）；SHS0.5单独处理细胞，与空白组比较，抑炎作用显著，但较DEX组比较，DEX组抑炎作用更强。在炎症存在条件下，低浓度时，与阴性对照组比较，SHS1相比SHSC和SHS0.5抗炎效果最强，高浓度时，SHSC与阴性对照组比，抗炎效果较强，两组分多糖抗炎效果与空白对照组及药物对照组差异显著；SHS0.5组分与空白组比较，显著增加抑炎因子IL-10释放量，与DEX组比较差异不显著，但与LPS组比较差异显著；此外，对炎症损伤的保护和修复作用实验中，比较多糖组与空白组，SHS1组分较粗多糖比较免疫调节能力强，主要通过抑制炎症因子TNF-α表达起到保护细胞及修复炎症损伤细胞的作用，而SHS0.5与LPS组比较，降低细胞因子IL-10水平，浓度为100μg/mL以上，与LPS组比较，显著降低IL-10和TNF-α水平，对细胞免疫功能进行调节。综上可知，SHS具有较强的抗氧化能力及免疫调节活性，且SHS对细胞无毒性，易制备，本研究为进一步将SHS开发成为免疫增强佐剂提供基础。
【作者】刘丽佳；
【导师】曲有乐；
【作者基本信息】浙江海洋学院，食品加工与安全（专业学位），2014，硕士
【关键词】铜藻；多糖；抗氧化；免疫；

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