大豆疫霉G蛋白α亚基互作蛋白的筛选及功能分析

【摘要】大豆疫霉(Phytophthorasojae)作为十分重要的植物病原卵菌之一,在大豆生产中引起毁灭性的病害——大豆疫霉根腐病。大豆疫霉无性生活史阶段产生孢子囊,释放游动孢子。在田间传播过程中,游动孢子识别寄主分泌的化学信号,定向游动定殖完成对寄主植物的侵染。因此,了解大豆疫霉游动孢子趋化性的分子调控机制,可以为有效的病害防控策略提供新的思路及方向。大豆疫霉G蛋白α亚基互作蛋白的筛选。实验室前期研究发现,大豆疫霉G蛋白Q亚基能够调控游动孢子对大豆根部释放的异黄酮的趋化性,揭示了G蛋白信号途径在大豆疫霉孢子囊形成和游动孢子行为方面具有一定的作用。为了了解大豆疫霉G蛋白α亚基通过调控哪些基因从而在G蛋白信号途径中起作用,我们利用酵母双杂交技术在大豆疫霉cDNA文库中筛选Gα亚基的互作蛋白。通过多次实验并对结果的初步验证,我们筛选得到了一个能够与Gα互作的激活态蛋白激酶C受体(ReceptorofActivatedProteinKinaseC)通过序列比对分析,该蛋白的同源基因为拟南芥中的AtRACK1,因此我们将该基因命名为PsRACK1.PsRACKl与Gα亚基一对一互作验证。在G蛋白信号途径中,Gα亚基存在激活与非激活两种不同形态。报道证明将非激活态Gα亚基R117位和Q203位的保守氨基酸精氨酸和谷氨酰胺替换为组氨酸和亮氨酸,可以破坏Gα亚基的GTP酶活性将其锁定在与GTP结合的激活状态。为了验证PsRACK1是否与两种形态的Gα蛋白均能够互作,我们分别用酵母双杂交和GSTPull-down体外互作验证技术对PsRACK1与PsGPAl和PsGPA1(R177H,Q203L)进行互作验证。两种实验技术所得结果均表明：PsRACK1能够与非激活态的PsGPA1直接互作,而与激活态的PsGPA1(R177H,Q203L)不能直接互作。大豆疫霉PsRACK1功能研究。为了了解PsRACK1在大豆疫霉中的功能,本文采用PEG介导的原生质体转化方法对PsRACK1进行沉默,得到两个沉默转化子。对PsRACK1沉默突变体营养生长、有性生殖、对胁迫因子的耐受性和致病力变化等方面表型进行一系列测定后发现,沉默突变体卵孢子产量较野生型显著下降,推测PsRACK1调控大豆疫霉有性生殖。
【作者】郝玉娟；
【导师】王源超；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】大豆疫霉；G蛋白α亚基；酵母双杂交；GSTPull-down；基因沉默；

【参考文献】
[1]董晓婵.不同二语水平影响下汉英双语隐喻脑机制的ERP研究[D].大连理工大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[2]赵国荣.义乌市商贸城可持续发展问题研究[D].西北工业大学,2005.
[3]公阿宁.嘉峪关魏晋壁画墓中的百姓服装研究[D].南开大学,设计学,2012,硕士.
[4]段超.刑事附带民事诉讼中死亡赔偿金问题研究[D].新疆大学,法律,2013,硕士.
[5]尹慧芳,徐建宁,冯洁惠.标准化沟通方式在重症监护病房病情交接中的应用[J].护理与康复,2014,07:688-691.
[6]王宏攀.TER公司售后服务人员绩效管理体系研究[D].苏州大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[7]骈淼.微机械压电超声换能器动态性能研究[D].南京理工大学,一般力学与力学基础,2013,硕士.
[8]张莹滢.商业秘密的刑法保护[D].中原工学院,科学技术哲学,2012,硕士.
[9]周鸿飞.船舶防污涂料及其减阻效应评价研究[D].大连海事大学,载运工具运用工程,2013,硕士.
[10]华刚,韩崇昭,万百五.具有双检测通道SISO系统的一种自校正算法[J].自动化学报,1991,03:376-378.
[11]卓子颖.武陵源区法治工作站依法治理社会的实践创新研究[D].湖南师范大学,中共党史,2014,硕士.
[12]孙福轩,周军.“源于诗”与“属于诗”——赋学批评的政治内涵和诗学维度之发覆[J].浙江大学学报(人文社会科学版),2014,06:153-165.
[13]冯皓宇.大肠癌中C-erbB-2 Ki-67EGFR的表达与预后的关系[D].山西医科大学,病理学,2002,硕士.
[14]李莉.论语篇为翻译的基本单位[D].江西师范大学,英语语言文学,2004,硕士.
[15]陈子阳,马朝虹,李宇佳,刘国华.量化关联规则的隐私保持挖掘方法[J].计算机工程,2005,11:74-76+98.
[16]胡倩倩.试论当代油画中的西藏题材绘画[D].安徽大学,美术学,2013,硕士.
[17]王宁.中央国家机关离退休职工社会化居家养老模式研究[D].中国地质大学（北京）,公共管理,2013,硕士.
[18]翟琳娜.用户体验对手机系统界面设计的重要性研究[J].美术教育研究,2014,11:91-92.
[19]张友伶.商标侵权视角下的商标近似判断研究[D].北京工商大学,民商法学,2012,硕士.
[20]包育晓.《看见》节目的话语分析[D].安徽大学,新闻学,2014,硕士.
[21]陈忠保,李嗣福.一种线性二次型调节器闭环稳定的充分条件及在预测控制中的应用[J].自动化学报,1999,03:100-103.
[22]殷俊.长沙地区食品中铅、镉、砷污染物调查及分析[D].湖南农业大学,食品工程,2012,硕士.
[23]杨志强.舞蹈教育对孤儿教育的价值及实践研究[D].湖南师范大学,音乐学,2013,硕士.
[24]芮建康.电远传转子流量计在间断生产过程中的应用[J].冶金自动化,1984,02:57.
[25]曹运红.复合材料用的金属预浸料及其应用[J].飞航导弹.2005(11)
[26]孙有为.基于磁芯线圈的经颅磁刺激器仿真与实验[D].华中科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[27]祝玉权.HLD银行客户关系管理研究[D].天津商业大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[28]王海宁.基于单片机的温度控制系统的研究[D].合肥工业大学,2008.
[29]马德堂,朱光明.弹性波波场P波和S波分解的数值模拟[J].石油地球物理勘探,2003,05:482-486+458-582.
[30]赵天麒.云计算环境下WEB应用的自动部署与资源分配[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[31]张文学.应用合作学习法提高高中生英语写作能力的探究[D].河北师范大学,学科教学,2013,硕士.
[32]张莲莲.基于socket hook的主机流量测量分析研究[D].济南大学,计算机技术,2012,硕士.
[33]韩启纲.模糊控制原理、设计及应用　第2讲　普通集合论基础[J].冶金自动化,1995,02:44-47.
[34]王丽芳.空心磁性吸波材料的制备及电磁性能研究[D].大连理工大学,材料加工工程,2013,硕士.
[35]杨舒航,董媛媛.2013年中国互联网治理研究四大议题[J].青年记者,2014,17:22-23.
[36]陈燕.1830系列光业务交换机的系统认证测试[D].浙江大学,光学工程（专业学位）,2014,硕士.
[37]王成科.FTY720联合低剂量FK506治疗大鼠急性脊髓损伤的研究[D].大连医科大学,外科学,2012,硕士.
[38]王聪.预制品生产批量与支付进度集成优化问题研究[D].华中科技大学,系统工程,2013,硕士.
[39]熊康.立式加工中心关键部件结构优化及铸造工艺设计[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[40]张勇.中学物理综合考试能力立意命题研究[D].东北师范大学,教育,2003,硕士.
[41]吕金辉.直觉模糊数的研究及在多属性决策中的应用[D].辽宁工程技术大学,应用数学,2012,硕士.
[42]陈俊卿.无线通信系统中的干扰协调技术研究[D].南京邮电大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[43]杨明,孙志挥.一种基于前缀广义表的关联规则增量式更新算法[J].计算机学报,2003,10:1318-1325.
[44]王达,荣冈,李鸿亮.一种变步长趋势子序列搜索算法[J].浙江大学学报(工学版),2004,12:33-36.
[45]郑露.博物馆展示城市文化的设计方法研究[D].广东工业大学,设计艺术学,2014,硕士.
[46]张偶.政府部门信息资源增值开发研究[D].黑龙江大学,档案学,2013,硕士.
[47]叶莹.论假想防卫过当[D].吉林大学,法律,2013,硕士.
[48]陈友祥,廖声刚.震源同步器同步精度的讨论[J].石油地球物理勘探,1999,S1:125-128+150.
[49]李杰.兰州地区高校学生体育社团发展现状及对策研究[D].兰州理工大学,体育人文社会学,2014,硕士.
[50]康瑞华.基于CSCW和分布式数据库技术的物流信息系统设计与实现[D].武汉理工大学,计算机应用技术,2004,硕士.