西瓜噬酸菌遗传操作系统的建立及选择性培养基的研制

【摘要】瓜类细菌性果斑病(Bacterialfruitblotch,BFB)是世界范围内严重危害葫芦科植物的一种检疫性细菌病害,其病原为西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)。迄今为止,对西瓜噬酸菌的研究多侧重于鉴定、生物学特性、病害发生规律等方面,对于其致病机理及致病相关基因的研究却很少。同时现有技术对该病害的防治也只是减轻危害,并不能完全控制该病害。因此,西瓜噬酸菌的致病相关基因及其致病机理的研究对于病害防治至关重要。本实验室利用Mini-Tn5转座子随机插入的方法,通过三亲交配原理成功构建了野生型xj112的突变体文库。同时筛选出在烟草上不能激发过敏性反应,对哈密瓜幼苗致病性下降的突变体,进而研究了部分致病基因的功能。但由于西瓜噬酸菌遗传系统的复杂性,得到同源双交换突变体的概率非常低,目前都是利用传统的同源重组方法,得到单交换缺失突变体,再通过回补和过表达来验证基因功能。本实验在传统方法上进行改进,将在蔗糖板上长势较差的西瓜噬酸菌进行适应性筛选,最后利用蔗糖来筛选双交换突变株。同时,在细菌两亲交配之后,省去得到单交换突变株的步骤,直接在蔗糖抗性平板上筛到双交换突变株,虽然平板上仍有单交换突变株长出,但得到双交换突变株的概率大幅度提高。因此本实验遗传操作系统的成功建立,为西瓜噬酸菌功能基因的研究提供了更可靠、更高效的依据。基于目前利用TWZ选择性培养基分离西瓜噬酸菌时,其上有一种生长较快,且易产生假阳性的细菌,本实验通过16SRNA测序、BIOLOG系统测定等方法,确定了该细菌为鲍氏不动杆菌。通过抗生素筛选,选择了头孢霉素作为抗生素。通过碳源筛选,确定D-葡萄糖酸作为唯一碳源,研制了一种可以有效抑制该杂菌生长,但不抑制西瓜噬酸菌生长的选择性培养基,西瓜噬酸菌在其上生长约2-3天即可呈现红色,与LA培养基,TWZ培养基对照,菌回收率达到90%以上。
【作者】袁云云；
【导师】胡白石；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】西瓜噬酸菌；双交换；sacB；鲍氏不动杆菌；选择性培养基；

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