RASSF1A蛋白表达对结肠癌细胞增殖的影响

【摘要】目的：探讨RASSF1A蛋白表达对结肠癌细胞增殖的影响,为揭示结肠癌发生发展提供实验依据。方法：收集60例结肠癌及40例正常结肠粘膜组织,采用免疫组织化学染色方法观察结肠癌及正常结肠粘膜组织中RASSF1A蛋白的表达情况,并分析其临床意义；构建pCDNA3.1-RASSF1A真核表达载体,转染结肠癌SW480细胞,G418筛选,建立RASSF1A稳定表达的SW480细胞系；采用细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验,观察RASSF1A表达后对SW480细胞生长增殖的影响；采用流式细胞术检测将RASSF1A导入SW480细胞后细胞周期与凋亡的情况。结果：1、免疫组织化学染色结果显示：RASSF1A蛋白在正常结肠粘膜中的表达阳性率为95%(38/40),在结肠癌中为46.7%(28/60),正常结肠组织中RASSF1A蛋白的表达阳性率明显高于结肠癌组织(P<0.01)。Duke’s分期的A+B期RASSF1A蛋白表达阳性率为61.1%(22/36),而C+D期为25%(6/24)；有淋巴结转移者RASSF1A蛋白表达阳性率为11.1%(2/18),而无淋巴结转移者为61.9%(26/42),RASSF1A蛋白表达与Duke’s分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。2、细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验结果均显示,与SW480和SW480-pCDNA3.1(+)细胞比较,RASSF1A表达后,SW480细胞的生长速度明显减慢,增殖能力降低,平皿形成的克隆体积变小、数目减少(SW480-RASSF1AVSSW480-pCDNA3.1(+)为62±26VS208±36,P<0.01),软琼脂形成的集落体积变小、数目减少(SW480-RASSF1AVSSW480-pCDNA3.1(+)为76±38VS472±64,P<0.01)。3、流式细胞术结果显示,与SW480和SW480-pCDNA3.1(+)细胞比较,SW480-RASSF1A细胞G1期细胞比率明显增加,而S期细胞比率显著降低(P<0.01);SW480-RASSF1A细胞的凋亡率也明显增加(P<0.01)。结论：1.结肠癌中RASSF1A表达与Duke’s分期和淋巴结转移有关。2.RASSF1A通过诱导细胞G1/S期周期阻滞和促进细胞凋亡,发挥其对结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用。
【作者】朱崎；
【导师】廖爱军；
【作者基本信息】南华大学，内科学，2012，硕士
【关键词】结肠癌；RASSF1A基因；蛋白表达；SW480细胞；细胞增殖；

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