凡纳对虾4℃冷藏条件下新鲜度表征蛋白的研究

【摘要】新鲜度对对虾等水产品的食用品质、安全有着巨大影响,新鲜度的高低在很大程度上决定了水产品的食用价值。对虾新鲜度判定对水产品食用安全、运输贮藏及生产加工有着重要意义。客观、准确评价水产品新鲜度和货架期已成为水产品安全生产、销售过程中需要解决的问题。鉴于此,本研究拟以具有较高经济价值的凡纳对虾为对象,结合传统的感官评价、化学评价、物理评价和微生物评价等方法,对4℃冷藏条件下凡纳对虾的品质变化研究,在建立适用于凡纳对虾肌肉组织蛋白质的双向电泳技术基础上,筛选此类对虾贮藏过程中典型肌肉蛋白差异点,通过采用统计学手段建立差异蛋白点与新鲜度品质性状之间的相关性,筛选出能表征凡纳对虾鲜度的特定差异蛋白,结合质谱技术和生物信息学手段分析鉴定其结构和功能,最后从基因水平进一步验证其变化特性,确证为新鲜度表征蛋白。本研究旨在为凡纳对虾新鲜度检测提供新的思路和科学依据,同时也可以全面而深入地了解对虾品质的变化机制及其与新鲜度品质之间的相关性,进一步从蛋白质分子角度深入解释对虾品质衰败的根本原因。主要研究结果如下：1.采用传统新鲜度评价方法,判定凡纳对虾在4℃冷藏条件下的品质变化。进行统计学分析,筛选出能反应凡纳对虾在4℃冷藏过程中的新鲜度评价指标色差、质构、TVB-N值(挥发性盐基氮)；反映品质变化的主要指标是质构特性、a*(黑-白色差)、c*ab(蓝-黄色差)、TVB-N值(挥发性盐基氮)、TBA(硫代巴比妥酸)、TVC(菌落总数)、pH值(酸碱度)、感官评价；综合分析了凡纳对虾在4℃冷藏条件下的新鲜度品质变化,建立了适合判定其品质变化的综合评价体系,得到贮藏货架期为5.5天；为全面分析其品质变化和新鲜度等级判定提供了参考和依据。2.优化并完善凡纳对虾肌肉双向电泳体系,筛选出差异蛋白点,进一步通过质谱鉴定,数据库搜索得到新鲜度表征蛋白。对虾双向电泳体系：样品纯化处理,裂解液中添加TBP,采用17cm,pH4-7的IPG胶条,最适上样量为120μg,上样体积为300μL,采用12.5%的二向分离胶和硝酸银染色。分析了凡纳对虾在4℃贮藏时肌肉蛋白质的变化规律,设置蛋白丰度比大于2(p<0.05),筛选出了25个差异蛋白点；采用MALDI-TOF-MS质谱鉴定(蛋白得分>84)得到了3个差异蛋白点的肽指纹图谱,经Mascot数据库比对分析,差异蛋白点为精氨酸激酶、磷酸丙酮酸水合酶、肌动蛋白T2,可作为凡纳对虾冷藏过程中的新鲜度指示蛋白进行后续研究。3.采用荧光定量PCR方法对不同保鲜条件下的凡纳对虾肌肉进行基因表达水平分析。研究表明,3个差异蛋白的mRNA表达量呈现下降趋势,与蛋白丰度变化趋势相一致；分析新鲜度指示蛋白结构与功能,能量蛋白精氨酸激酶、磷酸丙酮酸水合酶表达量下调,与前面品质变化指标质构特性硬度、K值变大呈现正相关,肌纤维结构蛋白肌动蛋白T2下调,与肌肉变软、色泽变暗等质构、色差特性的变化具有较好相关性；从而进一步验证了对虾鲜度表征蛋白的指示效果。
【作者】张帅；
【导师】王彦波；
【作者基本信息】浙江工商大学，食品工程（专业学位），2013，硕士
【关键词】凡纳对虾；品质评价；新鲜度；新鲜度指示蛋白；双向电泳；蛋白质组学；荧光定量PCR；

【参考文献】
[1]魏爱华.病理性瘢痕中P物质、肥大细胞、组织胺的表达及其与瘢痕增生和痛痒的关系[D].青岛大学,外科学,2003,硕士.
[2]孙鸣,骆燕,佳楠.主动配电网运行模式对微电网可靠性的影响评估[J].电力建设,2015,01:.
[3]冯小勤,陈贵宾,贾建明.卷曲BN纳米片电子性质的第一性原理计算[J].宁夏大学学报(自然科学版),2013,02:136-140.
[4]俞红.学术夏令营——培养与选拔高素质创新型人才的新途径[J].科教导刊(上旬刊),2015,02:34-35+40.
[5]王璐.基于平衡记分卡的民生银行秦皇岛分行绩效考核体系研究[D].燕山大学,工商管理,2014,硕士.
[6]王芳.公允价值计量属性对企业价值影响的实证研究[D].天津商业大学,会计学,2013,硕士.
[7]陈鹏飞.基于PC机群系统的序列比对并行FastLSA算法研究[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2004,硕士.
[8]李天祥.康德上帝存在的道德论证[D].复旦大学,宗教学,2012,硕士.
[9]李杏恩.PPy/LiMPO_4（M=Fe、Mn）复合正极材料的制备及其性能研究[D].河北工业大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[10]成冰.ACE公司生产管理的问题分析及改善[D].华东理工大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[11]徐根玖,刘洋,刘一鸣,张泽卿.基于熵权法的高等教育生源危机预测分析[J].统计与决策,2014,21:92-95.
[12]耿宝亮,胡云安,李静,赵永涛.控制增益为未知函数的不确定系统预设性能反演控制[J].自动化学报,2014,11:2521-2529.
[13]张扬.初、高中英语教材语法衔接分析与教学研究[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[14]张宝全.家族性淀粉样多发神经病家系TTRGly83Arg突变研究[D].中国人民解放军医学院,眼科学,2013,硕士.
[15]涂好运.绿色供应链下汽车零部件供应商评价研究[D].南昌大学,技术经济及管理,2012,硕士.
[16]王学广.环境因子对刺参行为及生长影响的研究[D].山东大学,海洋生物学,2013,硕士.
[17]丁国娟.重症脓毒症患者LBP和sCD14变化及意义[D].浙江大学,内科学,2004,硕士.
[18]江知瀚.含分布式电源的配电网优化研究[D].华中科技大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[19]冀恬红.河南省大遗址保护与旅游开发模式研究[D].河南科技大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[20]卡萨克（Antoine）.蜂窝网络中多输入多输出信道的设计和性能分析[D].北京交通大学,2014.
[21]李孝波.基于谱元法的玉田震害异常研究[D].中国地震局工程力学研究所,岩土工程,2014,博士.
[22]张秀宁.文学神性的消隐[D].吉林大学,文艺学,2004,硕士.
[23]梁昌振.硅基薄膜的结构与光学性质[D].广西大学,理论物理,2004,硕士.
[24]马小波.公民新闻传媒生态研究[D].西南大学,传播学,2013,硕士.
[25]张夏青.《中国神话传说》（第一章）翻译项目报告[D].华中科技大学,翻译,2013,硕士.
[26]谷艳平.巴中市商贸流通业发展问题研究[D].西南交通大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[27]石玲.我国检察机关提起环境民事公益诉讼制度研究[D].华中科技大学,经济法学,2013,硕士.
[28]张茗泰.基于时空Petri网的CPS建模与验证研究[D].苏州大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[29]李浩,柯屾,贾闻婧,张洁莹,李浩田,成喜雨,胡红刚,刘泽民,王红梅,陈志南.白银市某镉污染区人群尿镉基准剂量研究[J].公共卫生与预防医学,2014,06:13-16.
[30]安朋娜.超临界水腐蚀影响因素的分子动力学和WIDOM模拟研究[D].哈尔滨工业大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[31]吴宁鹏.鸡组织中常山酮残留的ELISA检测方法和HPLC检测方法研究[D].中国农业大学,基础兽医学,2004,硕士.
[32]鲁旭.《樵史通俗演义》研究[D].湖南师范大学,中国古代文学,2014,硕士.
[33]虞燕.江西省高校健美操运动员营养知识认知情况调查研究[D].江西科技师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[34]沈海峰,梁曼君.基于贝叶斯网络的数据挖掘技术[A].中国仪器仪表学会、深圳市科学技术协会.全国第十四届计算机科学及其在仪器仪表中的应用学术交流会论文集[C].中国仪器仪表学会、深圳市科学技术协会:,2001:5.
[35]苏玉烽.千兆网络通信系统的FPGA设计实现[D].西安电子科技大学,控制工程,2012,硕士.
[36]祁红媛,黄蓉.论山西晋南面塑的艺术与文化特征[J].艺术科技,2013,09:170.
[37]周磊.强化卷烟过程控制,提升生产管理水平的探索[J].轻工科技,2015,02:141-142.
[38]孙云慧.KL银行大庆分行贷款项目风险管理研究[D].东北石油大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[39]曹文娟.新时期农村社会人际交往的空间变迁[D].华中师范大学,社会学,2013,硕士.
[40]郭城.基于ZnSe量子点的化学发光和电化学方法对环境激素的分析研究[D].郑州大学,分析化学,2013,硕士.
[41]鲁玺.基于Passat1.8T的传动系参数匹配优化研究[D].长安大学,载运工具运用工程,2013,硕士.
[42]杨洋.金融保险中重尾分布间的控制关系与跳时点过程的精致渐近性[D].苏州大学,概率论与数理统计,2003,硕士.
[43]原锦辉.一个演绎对象数据库语言的设计与实现[D].山西大学,2003.
[44]陈梦真.20世纪末21世纪初印尼政治转型问题研究[D].广西师范大学,政治学理论,2013,硕士.
[45]霍静宇.日本学生初级汉语叙述体语篇衔接手段问题研究[D].中央民族大学,语言学及应用语言学,2004,硕士.
[46]马强明.基于多Agent的协作供应链管理系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[47]吴伟.全国人大代表履职制度研究[D].中共江苏省委党校,中共党史,2013,硕士.
[48]陈志明.中国证券市场保荐人制度探究[D].厦门大学,工商管理,2014,硕士.
[49]张勇.一种高精度的自动化数据处理方法[J].自动化学报,1996,05:624-628.
[50]黄晓英,张剑芳,徐世莲.信息融合技术在智能物流运输系统中的应用[J].包装工程,2004,03:74-75.