大豆球蛋白单抗制备和ELISA检测试剂盒研究及其应用

【摘要】大豆营养丰富,但是同时也含有多种抗营养因子(antinutritionalfactors,ANFs),是人和动物食品中一种重要的过敏原。大豆中含有的大豆球蛋白(glycinin)和p-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)是最主要的大豆抗原蛋白。本试验建立了检测大豆及大豆制品中大豆球蛋白的一种双抗夹心酶联免疫吸附方法(enzyme-linkimmunosorbentassay,ELISA)。研究分为三个试验,试验一：用纯化的大豆球蛋白分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔,制备了鼠抗大豆球蛋白单克隆抗体(monoclonalantibody,Mab)和兔抗大豆球蛋白多克隆抗体(polyclonalantibody,Pab)。经间接法ELISA测定兔抗大豆球蛋白多克隆抗体滴度,在血清稀释倍数为10,000时仍然为阳性反应,这个滴度满足试验的要求。通过与大豆中其它蛋白的交叉反应试验表明,所制备的单克隆抗体6F2细胞株对大豆球蛋白有很高的特异性。经间接法ELISA和Westernblotting等方法鉴定鼠抗大豆球蛋白单克隆抗体,结果表明Mab6F2能识别大豆球蛋白的酸性亚基,为探讨大豆球蛋白在仔猪中的致敏机理提供了一个潜在的分析工具。试验二：利用制备的单克隆抗体和多克隆抗体建立了检测大豆球蛋白的双抗夹心ELISA。该方法的线性范围为3～200ng/mL,灵敏度为1.63ng/mL,经回收率分析,大豆球蛋白的平均回收率在93.8%～103.3%之间,变异系数小于8.3%,由此可见Mab6F2-双抗夹心ELISA方法表现出较好的灵敏度、精密度和可重复性。试验三：用试验二建立的双抗体夹心酶联免疫吸附方法完成了469个全球主要大豆种质的大豆球蛋白的测定,并比较了不同产地、不同年份和5种不同加工工艺的大豆产品中大豆球蛋白的含量。该试验为大豆品种的选育以及不同加工工艺的大豆产品在畜禽饲料中的高效利用提供了基本参数,同时为今后进一步探讨大豆球蛋白在仔猪体内的致敏机理提供一个有效的分析工具。
【作者】陈婧舒；
【导师】李德发；马曦；
【作者基本信息】中国农业大学，动物营养与饲料科学，2014，硕士
【关键词】大豆球蛋白；单克隆抗体；多克隆抗体；酶联免疫法吸附法；

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