高产共轭亚油酸的菌种诱变选育及酶学特性研究

【摘要】共轭亚油酸(CLA),由于其具有抑制肿瘤、降脂、降胆固醇等促进健康的潜在生理功能,受到国内外学者的广泛关注。生产富含CLA的发酵制品,或者制得CLA作为食品添加剂加入食品中,成为食品工业发展的热点。本实验以菌株筛选、人工诱变处理得到高产菌株,及亚油酸异构酶的分离纯化为主要线索,所得实验结果如下：从市购泡菜中筛得能转化生成CLA的菌株,其中以菌株Ips929转化量最大。经紫外波长扫描和Ag+液相色谱分析,发酵产生CLA的量为30.913μg/mL,有两种主要异构体,9c,11t-CLA和10t,12c-CLA。经16srDNA测定为乳酸杆菌,命名Lactobacillussp.LL-ZSDS001,对该菌进行了生物学特性研究,发现其最适生长温度为37℃,培养27h,5%菌株接种量时,CLA总产量最大。当底物浓度为1.35mg/mL时,CLA产量和亚油酸转化率最大。以筛得的菌株Lactobacillussp.LL-ZSDS001为原始菌株,进行铯137-γ射线辐照和N离子束诱变共同处理。其中,铯137-γ射线辐照诱变,当辐照剂量为70Gy时,致死率在88.63%-92.80%之间。筛得1菌株,经5次传代培养后,保持较稳定且较强的产CLA的能力,为52.789μg/mL。对上述菌株进行N离子束诱变处理,处理条件为真空度1×10-3Pa,能量20keV,注入剂量20～140×2.6×1013N+/cm2。得菌体存活率曲线为“马鞍型曲线”,“鞍脊”出现在注入剂量为80、100、120×2.6×1013N+/cm2处。当注入剂量为100、120×2.6×1013N+/cm2时,菌株的正突变率及突变幅度都相对较高。共筛得5株突变幅度高于50%,并有稳定性遗传的菌株,其中以A1转化生成CLA能力最强,达到118.921μg/mL,比原始菌株的54.234μg/mL提高了119.27%。采用硫酸铵分级沉淀、透析浓缩、葡聚糖凝胶G-100层析处理,对Lactobacillussp.LL-ZSDS001突变株亚油酸异构酶进行分离纯化,经SDS-PAGE电泳分析,该亚油酸异构酶的分子量为69KDa。并对其酶学特性进行初步分析,该异构酶的最适pH值为8.0,最适温度为40℃,微氧环境能提高酶活力。
【作者】王婧波；
【导师】杜琪珍；
【作者基本信息】浙江工商大学，食品工程，2014，硕士
【关键词】共轭亚油酸；乳酸菌；N~+离子束诱变；亚油酸异构酶；

【参考文献】
[1]孙涛.奶牛源隐孢子虫的鉴定及隐孢子虫囊壁蛋白基因的克隆[D].安徽农业大学,预防兽医学,2012,硕士.
[2]张锦琼.一维镍纳米结构的氧化铝模板法制备及其磁性研究[D].山西师范大学,化学,2014,硕士.
[3]邹晓利.基于BCE平台的电信CRM系统的设计与研究[D].南京邮电大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[4]朱佳.具有测量数据丢失及系统时延的大系统鲁棒H_∞控制[D].南京邮电大学,控制工程（专业学位）,2013,硕士.
[5]苏轩,杨小明.蚕学馆在纺织丝绸教育发展中的重要作用[J].丝绸,2014,08:75-79.
[6]尹晓刚.原油破乳剂的研究与应用[D].吉林大学,化学工程,2013,硕士.
[7]杨瑞.《问梅轩诗草偶存》校注[D].广西大学,汉语言文字学,2004,硕士.
[8]于呈呈.马氏珠母贝外套膜和珍珠囊的转录组测序及矿化基因的表达研究[D].海南大学,水产养殖学,2014,硕士.
[9]孔立萍.微博问政视野下的我国政府公共危机管理机制研究[D].宁波大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[10]刘希旖.维持性腹膜透析患者中医证型与钙磷代谢关系研究[D].湖北中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[11]黄勇.中国商业银行业利润率研究[D].浙江财经学院,产业经济学,2013,硕士.
[12]徐义贤,王家映.小波谱及其对谐波信号的刻画能力[J].石油地球物理勘探,1999,01:22-28+122.
[13]潘荣基.国产300MW中间再热、凝汽式汽轮机新开发的电-液调节系统[J].发电设备.1990(11)
[14]贺伊琳.纯电动方程式赛车复合电源动力系统控制策略与试验装置研究[D].长安大学,车辆工程,2014,硕士.
[15]王军燕.肩痹病临床分型的特征红外热谱与针灸临床疗效评价[D].甘肃中医学院,针灸推拿学,2014,硕士.
[16]李菲菲.正五聚蛋白3和凝血酶原时间在脓毒症患者中的相关性研究[D].郑州大学,急诊医学,2013,硕士.
[17]伍国梁.分离筛选具有抑菌活性的海洋放线菌[D].青岛大学,病原生物学,2013,硕士.
[18]余洁.大型虚拟MIMO系统的性能分析[D].厦门大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[19]蒋志鸿.法国工科生五元合一企业实习系统研究[D].华中科技大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[20]王利.二维磁振子晶体带隙结构的优化研究[D].内蒙古师范大学,理论物理,2013,硕士.
[21]李永强.临近空间飞行器逆轨拦截技术研究[D].南昌航空大学,导航、制导与控制,2013,硕士.
[22]张天宇.非战时军事应急物流保障及其评价体系研究[D].长安大学,载运工具运用工程,2014,硕士.
[23]李涛.铝合金气体输送活性TIG焊方法研究[D].兰州理工大学,材料加工工程,2013,硕士.
[24]李凯.池州市森林生态承载力研究[D].中南林业科技大学,森林经理学,2013,硕士.
[25]唐琴琴.安徽汽车产业创新能力研究[D].安徽大学,产业经济学,2013,硕士.
[26]赵薇.基于三唑和双三唑双酰胺配体的功能配合物的合成、结构及其电化学和磁学性质[D].渤海大学,物理化学,2013,硕士.
[27]王阿燕.永春县农村集体建设用地使用权流转的现状、问题与对策[J].中国市场,2014,24:165-167.
[28]孙珑玥.中国当代观念摄影的本土化困境与应对之策[D].西安美术学院,美术学,2014,硕士.
[29]郑茹.生物吸附剂对地下水中铁锰的吸附特性研究[D].东北农业大学,生态学,2013,硕士.
[30]李超锋.杨树PtrMYB092和PtrMYB152转录因子在木质素合成中的功能研究[D].西南大学,遗传学,2014,硕士.
[31]徐旭.XK2535数控铣床关键部件与整机静动态特性研究[D].湖北工业大学,机械设计制造及其自动化,2013,硕士.
[32]邹丽姣.我国文化品牌经营探论[D].中国艺术研究院,艺术学,2014,硕士.
[33]袁亚文.Sb_2S_3等硫化物纳米晶的制备及性能研究[D].南京理工大学,材料工程,2013,硕士.
[34]高二平,王文中.石墨烯/Bi_2WO_6可见光催化材料合成及增强的光催化性能[A].中国化学学会、中国太阳能学会.第十三届全国太阳能光化学与光催化学术会议学术论文集[C].中国化学学会、中国太阳能学会:,2012:1.
[35]沈志军.纳米氧化铝/酚酞聚芳醚酮/环氧树脂复合材料的制备及其性能研究[D].北京化工大学,材料科学与工程,2013,硕士.
[36]郝秀兰.借鉴加创新成就“邵医模式”——访浙江大学医学院附属邵逸夫医院蔡秀军院长[J].中国医院,2014,11:28-30+3.
[37]张昆阳.网络中介服务提供者帮助行为的刑法分析[D].中国社会科学院研究生院,刑法学（专业学位）,2014,硕士.
[38]蒋军华.基于多描述编码的无线视频容错技术研究[D].杭州电子科技大学,计算机应用技术,2011,硕士.
[39]段放.儿童延时自我认知的发生研究[D].辽宁师范大学,发展与教育心理学,2012,硕士.
[40]刘茜.对中国媒体公信力与话语权的思考[D].湖南师范大学,新闻学,2013,硕士.
[41]魏彬.犯罪少年个案社会工作介入矫正探索[D].长春工业大学,社会工作,2013,硕士.
[42]许岩.我国社区银行的发展路径研究[D].山西财经大学,金融学,2014,硕士.
[43]张强.基于Web Services的洪水风险图信息管理系统设计与实现[D].大连理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[44]宋飞.图书馆行业协会建设研究[D].东北师范大学,图书馆学,2012,硕士.
[45]谷凤羽.内蒙古苏尼特左旗地区宝力高庙组上段火山岩的成因[D].石家庄经济学院,矿物学、岩石学、矿床学,2014,硕士.
[46]张建勋,唐洪英,龚箭.可重用集成设计单元模型研究[J].计算机工程与应用,2002,03:23-26.
[47]栾玉荣.用于UHF RFID零中频接收机的Sigma-Delta调制器的研究与设计[D].南京邮电大学,集成电路工程（专业学位）,2013,硕士.
[48]宋扬.椎体后凸成形术治疗新鲜骨质疏松性椎体压缩骨折的疗效[D].大连医科大学,外科学,2012,硕士.
[49]张吉美,叶婷,王辉.蓄热式钢包烘烤装置自动控制系统的应用[J].冶金自动化,2009,01:60-62+65.
[50]胡丹.私人武装保安抗击海盗的法律问题研究[D].大连海事大学,法律,2013,硕士.