转多基因水稻耐盐株系鉴定与评价

【摘要】土壤盐渍化是严重的非生物胁迫因素之一,很大程度的限制作物生长。我国盐渍土约3亿亩,占全国耕地面积的1/4,随着社会工业发展、自然气候变化和水资源短缺,土地的盐渍化日益加剧,严重制约着农业生产的可持续发展。水稻是我国重要的粮食作物,占我国粮食总产量的40%。水稻的生长受多种胁迫因素的影响,其中土壤盐渍化更是制约水稻生产产量。长期以来,国内外广泛开展了对盐渍土的改良和利用的研究,人们运用基因手段,从植物中分离克隆了可耐盐的相关重要基因,培植转基因耐盐作物。相关耐盐基因的研究不但可以探索植物耐盐机制,还可以开发利用生植物耐盐基因资源,为培育耐盐农作物品种奠定基础。通过利用基因手段,提高水稻的耐盐能力,具有深远的应用前景。本研究前期以优育29号水稻为试验材料,将水稻愈伤组织作为外植体建立了愈伤组织受体系统的高频再生体系,优化了农杆菌介导的水稻遗传转化体系,利用农杆菌介导的转化法将载体KETG(ICE1-LOS5-CBF3-ABAR-NCED3)多基因转入水稻,获得了转多基因优育29号植株。本研究以转基因植株的T3代种子为试验材料,对获得的转基因植株进行分子检测和耐盐性鉴定,主要研究结果如下：1.首次以优育29号T3代种子为试验材料,获得12K10、12K12、12K26、12K38四个转基因株系的基因组DNA,用ICE1、LOS5、CBF3、ABAR、NCED3基因的特异性引物进行PCR扩增,选取的植株基因组中均扩增出大小一致的目的条带,表明目的基因已经整合到水稻基因组中。2.125mmol/LNaCl胁迫处理24h后,以已提取的12K10、12K12、12K26、12K38四个株系的cDNA为模板,以actin为内参,用ICE1、LOS5、CBF3、ABAR、NCED3基因的特异性引物进行RT-PCR扩增,扩增产物用1.0%的琼脂糖凝胶进行电泳检测,选取的植株基因组中均扩增出大小一致的目的条带,表明目的基因均己在转基因植株中得到表达。3.在125mmol/L的NaCl胁迫下7d之后,四个转基因株系12K10、12K12、12K26、12K38的株高、地上部和根鲜重干重、叶绿素含量、叶绿素荧光参数、电导率和丙二醛含量等生理生化指标都优于对照植株CK,均呈显著差异水平,说明转多基因载体提高了转基因株系的耐盐能力。
【作者】靳继凯；
【导师】许兴；
【作者基本信息】宁夏大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】盐胁迫；水稻株系；耐盐鉴定；耐盐评价；

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