CdTe量子点对仔猪空肠上皮细胞标记及蛋白基因表达的研究

【摘要】研究选用的试验材料为光谱发射波长530nm（绿光）和625nm（红光）两种CdTe量子点，粒径为3～5nm，其荧光量子产率达82%和半峰宽度为27nm。试验将这两种CdTe量子点对仔猪空肠上皮细胞（pigletsintestinalepithelialcellline，IPEC-1）标记并进行蛋白基因表达的研究，为其在临床应用中作为药物标记载体或组织细胞的示踪物对动物疾病的诊断和治疗提供依据。试验主要内容如下：1．CdTeQDs对仔猪空肠上皮细胞活性的影响：试验采用MTT法和细胞计数法对比检测两种CdTeQDs对IPEC-1细胞作用24h时细胞生长的影响，设置的浓度水平为0.72μmol/L，1.8μmol/L，3.6μmol/L和18μmol/L，每个浓度和对照组均设3个重复。结合电子显微镜(Electronmicroscope,EM)和倒置显微镜观察细胞形貌及核质变化，最终确立CdTeQDs对细胞标记的最佳浓度和分析细胞代谢活性的影响因素。结果表明：（1）CdTeQDs的浓度与细胞的增殖活性呈明显的剂量-效应关系；与对照组相比，0.72μmol/L和1.8μmol/L的细胞存活率差异不显著(P＞0.05)，3.6μmol/L的细胞存活率差异显著（P<0.05），而18μmol/L的细胞存活率差异极显著（P<0.01）。（2）在相同的浓度下，625nm（红光）CdTeQDs对细胞的生长抑制作用小于530nm（绿光）CdTeQDs的作用，低于1.8μmol/L剂量CdTeQDs对细胞的生长无影响。2．CdTeQDs对仔猪空肠上皮细胞的标记研究：选取上述试验的四个浓度的CdTeQDs对IPEC-1细胞进行标记和HE染色。用荧光显微镜观察细胞。结果表明：细胞作用3h时，625nmCdTeQDs对细胞膜进行了良好的标记，能清晰分辨出细胞核质形态；530nmCdTeQDs标记的是细胞质；1.8umol/L的剂量浓度是较好的细胞标记浓度，不影响细胞的活性。3．CdTeQDs作用仔猪空肠上皮细胞蛋白基因表达的研究：试验选取野猪金属硫蛋白基因（Metallothionein,MT-1）和肠三肽因子（TrefoilFactor3,TFF3）两种蛋白基因做mRNA表达分析。试验将两种不同最大发射波长的CdTe量子点530nm（绿光）和625nm（红光）作用于IPEC-1细胞中，对量子点的四个不同浓度在0h、3h、12h、24h和48h对MT-1和TFF3两种蛋白做mRNA表达分析。结果表明：（1）随着CdTeQDs浓度的增加，两种量子点的相对表达量均上调；（2）MT-1在24h出现了表达高峰，差异极显著（P<0.01）；3h和48h的表达量基本相同，无显著表达差异(P＞0.05)；（3）TFF3在48h内其表达量是上调的，与对照组相比，该蛋白基因在12h时的表达差异显著（P<0.05），在48h时差异极显著（P<0.01）。试验总体表明：首先，CdTeQDs对IPEC-1细胞生长的抑制作用与CdTeQDs作用细胞的浓度、作用时间和本身的粒径大小有关；再次，625nmCdTeQDs对细胞膜进行了良好的标记，530nmCdTeQDs标记的是细胞质，1.8umol/L的剂量浓度是较好的细胞标记浓度。
【作者】李丽娟；
【导师】郭亮；
【作者基本信息】天津农学院，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】CdTeQDs；荧光纳米材料；仔猪空肠上皮细胞；蛋白基因；

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