环磷酰胺原料药中有关物质的分析方法

【摘要】在现代制药业、药物开发和制造中,原料的制备、产品的合成和保存等过程中均会不同程度地带入一些杂质。由于杂质和副产物对人体有潜在毒性,因此准确地鉴定微量杂质和副产物极其重要。各国药典也对于药物及其关键中间体的纯度都有严格要求。环磷酰胺是临床常用的烷化剂类免疫抑制剂,主要用于肿瘤免疫,对多种肿瘤有明显的抑制作用。环磷酰胺原料药在生产和贮存过程中会产生多种杂质,参考美国药典要求,应采用有效的分析方法进行检测。其中降解产物A—二(2-氯乙基)胺盐酸盐具有高毒性,利用美国药典(USP)推荐的有关物质分析法较难检出。本研究采用薄层色谱、高效液相色谱和离子交换色谱分离方法系统对环磷酰胺原料药的有关物质,进行了分离检测,建立了环磷酰胺的有关物质分析方法。主要结论如下：1.利用薄层色谱法(USP)在专属性实验考察了杂质1在限度浓度下及环磷酰胺降解产物A在不同浓度下的检测,因在薄层板上均未出现清晰的斑点,而标准样品溶液具有清晰的斑点,说明在本实验条件下USP推荐的薄层色谱法并不适用于杂质1及降解产物A的检测。在检测限试验中,降解产物B-D的检测限均为0.03%,小于0.06%的杂质限度,灵敏度高。而是适合环磷酰胺降解产物B-D的限度检测的分析方法。2.建立了环磷酰胺中降解产物B及杂质1的HPLC-UV定量检测方法：大连依利特柱HypersilODS-2(250mm×4.6mm,5μm),水和乙腈(77/23)混合液为流动相,流速为1.0ml/min;柱温：25℃；检测波长为195nm；进样量20μL。杂质1与降解产物B在1.75～47.浓度范围内线性关系良好(R>0.996,n=6),准确度实验的回收率在94～110%范围,精密度相对标准偏差不超过5.0%,该方法的检测限最低可达0.08μg/ml。3.建立了环磷酰胺中降解产物A的离子交换色谱-TCD定量检测方法：采用色谱柱lonPacCS12A(250mm×4.0mmAnalytical),以甲烷磺酸为流动相,流速为1.0ml/min,电导检测器,柱温25℃,进样量25μL。在此条件下降解产物A的定量限(LOQ)浓度是1.80μg/ml检测限浓度是0.54μg/ml;在LOQ～24.04μg/ml浓度范围内线性关系良好(R>0.999,n=6),LOQ～24.04μg/ml浓度等级的添加水平范围内的平均回收率为76～103%,相对标准偏差不超过5.0%。该方法对降解产物A专属性强、精密度高、准确度好。
【作者】袁红露；
【导师】黄梅；
【作者基本信息】浙江大学，制药工程（专业学位），2014，硕士
【关键词】环磷酰胺；降解；薄层色谱；高效液相色谱；离子色谱；

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