国产水痘减毒活疫苗株即刻早期基因ORF62特征的分析

【摘要】目的：通过比较两株国产水痘减毒活疫苗株(vOka)与其父系株(pOka)的即刻早期基因ORF62启动子区序列、启动子的启动活力和启动子区转录因子结合基序的差异,以及ORF62编码区序列及其编码即刻早期蛋白(IE62)反式激活力的差异,探讨vOka株ORF62突变在其减毒机制中的可能作用。方法：1、应用分子克隆技术克隆构建长春百克生物科技股份公司vOka-BK株、上海生物制品研究所vOka-SH株、葛兰素-史克公司vOka_GSK株(对照)及其父系pOka株ORF62启动子的启动子-报告子质粒,以及ORF62编码区的表达质粒。2、应用基因测序技术测定三株vOka与其父系株pOka的ORF62启动子区和编码区序列并分析其差异。3、应用转录因子结合基序(motif)扫描软件TFSEARCH分析三株vOka与其父系株pOka的ORF62启动子区转录因子结合基序并比较其差异。4、应用基因转染瞬时表达技术分析三株vOka与其父系株pOkaORF62启动子的启动活力以及ORF62编码蛋白IE62对即刻早期(IE)基因ORF4、早期(E)基因ORF28和晚期(L)基因ORF67启动子反式激活力的差异。结果：1、与父系株pOka比较,三株vOka的ORF62启动子区110,050位点存在一致性T缺失突变。2、三株vOkaORF62启动子区110,050位点T缺失突变未导致启动子区转录因子结合基序改变。3、在pOka株或vOka株IE62激活下,三株vOkaORF62启动子的启动活力均显著低于其父系株pOka。4、三株vOkaORF62编码区存在一致性106,262位点T→C置换突变、107,136位点T→C置换突变、107,252位点T→C置换突变,这些碱基置换突变各新增一个限制性内切酶SmaⅠ、NaeⅠ和BssHⅡ的酶切新位点。5、除vOka-SH株IE62在CV-1细胞中对即刻早期基因ORF4启动子的反式激活力显著低于pOka株外,三株vOkaIE62在CV-1和MeWo细胞中对即刻早期基因ORF4、早期基因ORF28和晚期基因ORF67启动子的反式激活力均显著高于pOka株。结论:1、三株vOkaORF62启动子区110,050位点存在的T缺失突变可能是其启动子启动活力降低以及IE62反式激活力改变的原因之一。2、三株vOkaORF62启动子区110,050位点T缺失突变区转录因子Spl结合基序并非水痘减毒活疫苗减毒的必需因素。3、vOka株和pOka株ORF62编码IE62均可弱激活其自身启动子。4、vOka株与pOka株ORF62启动子的启动活力和ORF62编码IE62的反式激活力差异与转染所用细胞类型的关系不大。
【作者】吴宁俊；
【导师】王官清；
【作者基本信息】厦门大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】水痘-带状疱疹病毒；即刻早期基因62；启动子活力；反式激活力；

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