高尔基体驻膜糖蛋白GP73启动子的研究及其在靶向肝癌腺病毒治疗中的应用

【摘要】癌症是人类疾病中仅次于心血管疾病的第二大杀手，严重威胁着人们的生命健康和安全。在我国癌症发病率正呈现出逐年增加的趋势，并且越来越年轻化。肝癌在我国的死亡率居所有恶性肿瘤第二位，目前，对于肝癌的治疗主要以手术切除、化疗和放疗为常用治疗方式，其中手术切除对于早期患者来说是可行的，但是对于大多数患者是不现实的，尤其是肝癌晚期，传统的治疗方法已难以奏效，迫切需要新的技术来提高患者的生活质量和生存率。基于癌症的靶向基因-病毒治疗（targetinggene-virotherapy)的策略，以病毒为载体联合基因治疗和病毒治疗的优势，为肿瘤治疗带来了新的希望。高尔基体驻膜糖蛋白（GP73）是近年发现的一种糖蛋白。研究发现，GP73是一种很好的肝癌标志物，其灵敏性和特异性均高于传统肝癌标记物AFP，分别达到75%和97%，而AFP仅为58%和85%。基于这一特性，本论文首先克隆了GP73启动子序列，通过Dual-Luciferase双荧光报告系统，对其活性进行了检测，筛选出较高启动子活性的659bp核心序列。随后，基于Adeasy腺病毒系统和课题组现有溶瘤腺病毒ZD55，我们将腺病毒内源型E1A启动子替换成GP73启动子，构建了肝癌特异GP73启动子调控E1A区并删除E1B55kDa和E3区的选择性复制型溶瘤腺病毒GD55，以及携带EGFP绿色荧光蛋白的腺病毒GD55-EGFP。体外实验结果表明，GD55系统较ZD55系统具有良好的肝癌特异性增殖能力，显示了其靶向性杀伤肝癌细胞生长的效应，并且对肝正常细胞的毒性较小；进一步的体内裸鼠实验表明，GD55比ZD55具有更好的抗肝癌移植瘤生长的作用。总之，本研究成功筛选出具有肝癌特异性的GP73启动子核心区，并且构建了肝癌靶向溶瘤腺病毒载体GD55，初步实验表明其具有较好的肝癌特异性，可以作为肝癌的靶向基因-病毒个性化治疗策略，为以后临床肝癌个性化治疗奠定基础。
【作者】刘涛；
【导师】王毅刚；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】ZD55；GD55；溶瘤腺病毒；肝癌细胞；靶向基因-病毒治疗；

【参考文献】
[1]郭明,郑惠莉.电信业呼吁数据挖掘[J].中国电信业,2004,12:50-52.
[2]李伟.基于TSC695F的星载数管计算机设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2011,硕士.
[3]宋莎莎.凸随机合作对策的拓展及其解的研究[D].燕山大学,运筹学与控制论,2013,硕士.
[4]程三六,朱德文,陈永生,严克华,肖宏儒,任彩红.水稻微密孔膜活性基质机械育苗配机插技术体系的研究[J].中国农机化.2007(04)
[5]乔良才.基于ArcGIS Engine的区域墒情分析系统设计与实现[D].河北工程大学,计算机技术,2012,硕士.
[6]陈瑶.基于Linux的液晶屏检测软件的设计与实现[D].华中师范大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[7]虞召源.高速精密自动光学检测机的结构分析与优化[D].华南理工大学,机械工程,2012,硕士.
[8]夏南.不同氨氯地平对SHR大鼠血压、肾脏的影响[D].华中科技大学,内科学,2013,硕士.
[9]郗凤辉.社会主义新农村共同富裕的实践探索[D].天津大学,马克思主义理论,2013,硕士.
[10]洪钢.皮肤扁平苔藓细胞周期调控蛋白E2F、Rb、P27的表达及意义[D].浙江大学,皮肤病与性病学,2004,硕士.
[11]张士兵.2BS-600水稻钵盘播土机播土性能的试验研究[D].黑龙江八一农垦大学,农业机械化工程,2014,硕士.
[12]刘晓.非手术食管癌临床分期的研究与应用[D].北京协和医学院,肿瘤学（专业学位）,2014,博士.
[13]仵季红.多媒体电子出版物形式设计研究[D].北京印刷学院,传播学,2004,硕士.
[14]马蓉.山西省普通本科院校软式排球开展现状及对策研究[D].山西师范大学,体育教育训练学,2014,硕士.
[15]郑真.浙江省企业外包强度与企业绩效的关系研究[D].浙江工业大学,2008.
[16]冯凯.基于大气衰减与日光光谱的建筑视看色差软件研究[D].重庆大学,建筑学（专业学位）,2014,硕士.
[17]向蓉.场域的力量：网络文学的文化权力研究[D].湖北民族学院,文艺学,2014,硕士.
[18]王建斌.邢台市国有企业职工体育行为与工作生活质量的相关研究[D].河北师范大学,体育教学,2013,硕士.
[19]葛亮.256排CTA在颈部动脉夹层诊断及介入治疗中的应用[D].复旦大学,影像医学与核医学,2012,硕士.
[20]王磊.歌唱心理定势在声乐教学中的培养与构建[D].辽宁师范大学,音乐与教学论,2011,硕士.
[21]何晓梅.热处理—有机改性凹土的制备及除藻除浊效能研究[D].广东工业大学,市政工程,2014,硕士.
[22]刘嗣俊.近距离煤层群下保护层开采瓦斯运移规律及抽采研究[D].湖南科技大学,安全技术及工程,2013,硕士.
[23]张树永,王玉枝,苑世领.国内外高校化学专业师资队伍状况的比较与对策研究——高等化学教育咨询评议项目系列之三[J].大学化学,2014,03:9-12.
[24]郭新.基于污染足迹的水环境生态风险研究[D].南京财经大学,数量经济学,2013,硕士.
[25]王亚英,邵惠鹤.基于二元决策系统的粗集知识获取方法研究[J].控制与决策,2001,03:374-377.
[26]路清.影视动画表演思维与表演技巧的应用研究[D].陕西科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[27]罗贤春.经济信息分析研究[D].湘潭大学,2002.
[28]文杨.数据挖掘:实现有效CRM的动力[J].科技情报开发与经济,2004,01:184-186.
[29]李静.氟硅唑的合成研究[D].河北工业大学,应用化学,2013,硕士.
[30]彭愉康（PangPeter）.针灸在香港的历史、现状、发展展望及香港社会人口与针灸使用的关系的Logistic回归分析[D].南京中医药大学,针灸推拿,2014,博士.
[31]刘晓庆.基于数据挖掘的客户关系管理（CRM）研究[D].东北财经大学,2005.
[32]徐健.D物流公司LNG业务拓展战略研究[D].北京交通大学,2013.
[33]郭朝晖,徐国栋,刘斌,陈立新,卢克斌,张振山,刘如九,柴天佑.宝钢连铸板坯动态轻压下模型的研究与开发思想(下)[J].冶金自动化,2007,04:1-4.
[34]倪程云.内弹道弹丸测速信号处理技术研究[D].西安电子科技大学,测试计量技术及仪器,2012,硕士.
[35]靳春燕.基于SPOT遥感数据的植被覆盖度与水文气象因子的变化研究[D].内蒙古农业大学,水文学及水资源,2012,硕士.
[36]吴程伟,刘雅惠,梁洁颖.新媒体,新挑战,新契机——浅析新媒体形势下公共关系应对之道[J].现代物业(中旬刊),2013,09:13-15.
[37]樊建聪.使用贝叶斯方法的数据挖掘及应用研究[D].山东科技大学,2003.
[38]潘沈仁.FDI、进出口贸易对全要素生产率的影响[D].浙江理工大学,产业经济学,2014,硕士.
[39]蓝益鹏.双位置环直线伺服同步系统鲁棒控制[D].沈阳工业大学,电力电子及电力传动,2003,硕士.
[40]李艳芳.烟台地区慢乙肝合并非酒精性脂肪性肝病临床特征及脂联素、α-SMA表达[D].滨州医学院,内科学,2011,硕士.
[41]王博.风荷载作用下高耸塔架结构的动力响应[D].兰州理工大学,工程力学,2014,硕士.
[42]于晓艺.知识产权存在合理性的哲学分析[D].吉林大学,科学技术哲学,2004,硕士.
[43]张岩.自由表面流—水平潜流复合人工湿地磷去除动力学分析[D].中国林业科学研究院,生态学,2014,博士.
[44]杜瑛.我国普通高等学校分类研究[D].华东师范大学,高等教育学,2004,硕士.
[45]孙尧.分化型甲状腺癌术后行~(131)I治疗（清甲）对分化型甲状腺癌复发的影响[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[46]蔡正平.人民币汇率波动性分析及预测实证研究[D].华侨大学,金融学,2013,硕士.
[47]陈春杨.光快门漂白进样—固定化酶技术连用的毛细管电泳高时间分辨在线酶反应研究[D].东北师范大学,分析化学,2012,硕士.
[48]胡来宾.代价敏感贝叶斯分类方法改良[D].广西师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[49]徐少丹,范杰.纳米科学与技术及其应用[J].国际学术动态,2014,03:30-31.
[50]钟英杰,沈忠良,邓凯,王明晓.化学当量比对声场作用下三区火焰动力学行为的影响[J].燃烧科学与技术,2014,04:290-296.