间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒系统中的表达研究

【摘要】间日疟(Vivaxmalaria)是由间日疟原虫(Plasmodiumvivax)引起的周期性发作的急性传染病，特点是间隔48小时反复发作。如今已有的抗疟疾药物也由于抗药性疟原虫以及耐杀虫剂传播蚊的出现而面临挑战。制备疟疾疫苗也就成为了能有效控制疟疾传播的主要手段。其中传播阻断疫苗（transmissionblockingvaccines，TBVs）是以蚊虫阶段疟原虫特异表达的虫体表面蛋白作为抗原免疫人体，使之产生抗蚊阶段疟原虫表面蛋白的特异性抗体。间日疟传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是疟疾研究的主要靶点，其在不同地区的疟疾病毒株间具有很高的保守性。Pvs25是在合子以及动合子表面表达的蛋白，分子量为25kDa，含有22个半胱氨酸形成的11个二硫键，序列含有4个类表皮生长因子结构域(EGF-likeDomain)。本课题通过构建原核表达质粒pET-32a-Pvs25获得工程菌，经IPTG诱导后重组蛋白大量表达；从诱导菌体超声破碎后的上清中提取重组蛋白，经Ni亲和层析纯化后，获得重组蛋白纯度达到95%；将纯化后的重组蛋白免疫Balb/c雌鼠制备多克隆抗体；纯化后的抗体经间接ELISA测定效价为1：12800。同时，利用家蚕生物反应器平台的Bac-to-Bac系统成功获得重组杆状病毒vBm-Pvs25，感染家蚕细胞、家蚕五龄幼虫，WesternBlotting分析结果显示，目的蛋白表达成功。构建BmCMV-gp64-Pvs25，在载体的多角体启动子前面串联一个CMV启动子序列，这样表达的重组蛋白Pvs25不仅可以在BmNPV的表面展示，而且可以在哺乳动物体内展示。获得重组杆状病毒vBmCMV-gp64-Pvs25，用于感染家蚕细胞，经SDS-PAGE、WesternBlotting分析、激光共聚焦观察，发现目的蛋白成功表达并展示于质膜表面。利用纯化得到的vBmCMVgp64-Pvs25病毒粒子免疫Balb/c小鼠获取抗血清，并对其免疫原性进行研究，结果表明其中和效价为1：25600，可以有效刺激机体产生免疫保护反应。本课题为间日疟传播阻断疫苗的进一步研究奠定了基础。
【作者】盛稳稳；
【导师】盛清；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】传播阻断疫苗；候选抗原；Pvs25；杆状病毒；表面展示技术；vBmCMV-gp64-Pvs25；

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