疯草内生真菌-Undifilum oxytropis合成苦马豆素的研究

【摘要】疯草是豆科棘豆属和黄芪属含有苦马豆素的有毒植物的统称,其主要毒性成分为苦马豆素(swainsonine,SW),它是导致动物疯草中毒的根本原因。近年研究表明,疯草内普遍存在能产生SW的内生真菌——弯曲牙管蠕孢菌(Undifilumspp),该类内生真菌是疯草中SW产生的主要因素,抑制或阻断内生真菌合成SW,将有望降低或消除疯草的毒性。目前,疯草内生真菌中的SW合成途径仍不清楚,研究各种因素对SW合成的影响可为进一步阐释疯草内生真菌中SW的生物合成途径和分子调控机制奠定基础。本文主要对疯草中产SW内生真菌进行分离与鉴定,并研究不同因素对疯草内生真菌合成SW的影响,产SW内生真菌原生质体制备及再生,为进一步阐释疯草内生真菌中SW的生物合成途径、分子调控机制及疯草内生真菌突变菌株的选育奠定基础。1.从宁夏黄花棘豆中共分离到5株真菌,其中菌株NX-FEL001菌丝中含有苦马豆素,经诱导培养,该菌株能够产生分生孢子及分生孢子梗等结构,序列同源性和系统发育分析表明该菌株与Undifilumoxytropis真菌的亲缘关系最近,根据形态结构和分子进化分析结果将菌株NX-FEL001鉴定为U.oxytropis。2.研究不同pH、聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)、L-哌可酸、L-赖氨酸、α-酮戊二酸对U.oxytropis的生长和SW合成的影响。结果表明,当pH在4.5-6.5之间时,pH对U.oxytropis的生长无显著影响,但在该范围内,较低的pH可抑制真菌SW的合成；PEG可促进U.oxytropis的生长,但会抑制真菌SW的合成；L-哌可酸可显著促进U.oxytropis的生长,当其在培养基中的初始浓度为10-3mol/L和10-2mol/L时,真菌中SW的合成受到抑制,当其浓度为10-4mol/L时,真菌中SW的合成显著增加；当培养基中L-赖氨酸的初始浓度为10-3mol/L时,U.oxytropis中SW的合成显著增加,而当,L-赖氨酸的初始浓度为10-2mol/L或10-4mol/L时,真菌的SW合成受到显著抑制。当培养基中α-酮戊二酸的初始浓度分别为10-1mol/L、10-2mol/L、10-3mol/L时,U.oxytropis生长及SW合成的受到抑制；以上研究结果表明,L-哌可酸、L-赖氨酸、α-酮戊二酸可能是U.oxytropis合成SW的前体物质。3.悬菌液涂布于固体培养基上22℃培养15d,以1mol/L山梨醇配制1%纤维素酶+1%蜗牛酶+0.1%溶壁酶组成的复合酶系,在菌丝与酶解液质量体积比为1：10,酶解温度为35℃,80r/min振荡酶解3h时的条件下,U.oxytropis原生质体的生成量最大。纯化后的原生质体在1mol/L山梨醇配制的YCM再生培养基上可再生,再生率达8.5%,经检测再生后菌丝仍然能够产生SW。
【作者】张蕾蕾；
【导师】何生虎；余永涛；
【作者基本信息】宁夏大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】疯草；内生真菌；Undifilumoxytropis；苦马豆素；生物合成；

【参考文献】
[1]杨佳.傅里叶变换红外光谱技术在芝麻油真伪鉴别、掺伪与品质分析中的应用[D].北京林业大学,农产品加工与贮藏工程,2013,硕士.
[2]王大炜.基于点特征从运动恢复三维形状[D].西北工业大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[3]张旭瑾.经济话语中隐喻的认知研究[D].山西师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[4]张俊廷.L6-201井区高含水期层系细分及井网重构研究[D].东北石油大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[5]彭兴.CH_3CN及CH_3NC在Ni表面吸附的密度泛函理论研究[D].中北大学,工业催化,2014,硕士.
[6]纪海波.西瓜种质资源表型多样性研究[D].甘肃农业大学,蔬菜学,2013,硕士.
[7]巫海燕.临安县手工业社会主义改造研究[D].浙江大学,中国近现代史,2012,硕士.
[8]王莹莹.新历史小说的寓言化叙事倾向[D].辽宁大学,中国现当代文学,2012,硕士.
[9]王宏,柴天佑,丁进良,布朗·马丁.数据驱动的故障诊断与容错控制:进展与可能的新方向(英文)[J].自动化学报,2009,06:739-747.
[10]唐雪桐.战略性新兴产业现金股利分配的影响因素研究[D].河北经贸大学,会计学,2014,硕士.
[11]夏勃.动态自适应流媒体技术的研究与实现[D].中国科学院研究生院（沈阳计算技术研究所）,计算机科学与技术,2014,硕士.
[12]许柏英.铜绿微囊藻气囊蛋白GvpF的结构与功能研究[D].中国科学技术大学,生物化学与分子生物学,2014,博士.
[13]牛耀东.胸腺切除术治疗国内眼肌型重症肌无力的系统评价[D].郑州大学,外科学,2013,硕士.
[14]孙晓冬.NF公司变革中的人力资源管理策略研究[D].天津大学,工商管理,2013,硕士.
[15]廖永娟.氟碳表面活性剂的性质及其在酸性介质中的缓蚀性能[D].内蒙古科技大学,材料物理化学,2013,硕士.
[16]蒋冠.金融摩擦条件下货币传导机制的微观基础研究[D].复旦大学,2004.
[17]谢中榜.苏珊·桑塔格早期艺术接受观研究[D].上海社会科学院,文艺学,2012,硕士.
[18]李先斌.基于LabVIEW的精准农业实时监控系统设计与实现[D].郑州大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[19]于超.国家男子蹦床队备战北京奥运会冬训期训练负荷的研究[D].山东体育学院,体育教育训练学,2012,硕士.
[20]贡凯军.液力机械叶片现代设计方法[J].木工机床.2007(01)
[21]吴宜涵.美国渔民溢油事故中的基金赔偿制度对中国的启示[D].中国政法大学,比较法学,2014,硕士.
[22]张雪梅.广义Kirkman方的构造[D].河北师范大学,应用数学,2012,硕士.
[23]李琨.异位再生组织中牙源性干细胞的生物学性能研究[D].第四军医大学,口腔临床医学（专业学位）,2014,硕士.
[24]夏暑芳.产品召回制度研究[D].湘潭大学,经济法,2012,硕士.
[25]郜美娜.水利移民实物指标数据移动采集系统设计与实现[D].浙江大学,自然地理学,2013,硕士.
[26]谢金华.基于智能控制策略的切削颤振抑制研究[D].山东大学,机械电子工程,2013,硕士.
[27]鲁秋子,徐田华,唐涛.混杂系统主动容错架构在车载设备的应用研究[J].铁路计算机应用,2014,01:1-5.
[28]周舟.基于多道奇异谱分析方法的地震数据重建[D].中国地质大学（北京）,地球物理学,2014,硕士.
[29]李东元.金融资源促进区域经济均衡发展研究[D].山东财经大学,区域经济学,2014,硕士.
[30]闫红玉.线性光学系统中的量子直接通信[D].大连理工大学,理论物理,2013,硕士.
[31]李文雷.乌司他丁肺灌注液在深低温体外循环中未成熟肺保护及microRNA表达谱研究[D].北京协和医学院,外科学,2014,博士.
[32]侯爽.最终控制人、外部制度环境影响民营上市公司的路径和经济结果[D].复旦大学,金融学,2012,硕士.
[33]黎春燕.非共价功能化石墨烯载铂催化剂的制备及其性能[D].北京化工大学,材料科学与工程,2013,硕士.
[34]王浩.文学评奖制度研究[D].西南大学,美学,2013,硕士.
[35]刘成军.秦祁结合部位物质组成、构造演化过程及交接关系研究[D].长安大学,构造地质学,2013,硕士.
[36]匡野.通过优化Kex2 P1’位点在毕赤酵母中高效表达重组蛋白SCF[D].吉林大学,生物医学工程,2014,硕士.
[37]张长雷.探地雷达技术在复杂地质条件下的应用研究[D].安徽建筑工业学院,结构工程,2012,硕士.
[38]张恒.基于平衡计分卡的军队旅团级单位绩效审计研究[D].南昌大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[39]代汝林.易滑地层码头岸坡稳定性研究[D].重庆交通大学,港口、海岸及近海工程,2012,硕士.
[40]王钊.BIM在非线性建筑设计中的应用研究[D].北京建筑大学,建筑学,2013,硕士.
[41]陈国文.武威市农村中学篮球运动开展现状与对策研究[D].西安体育学院,体育,2013,硕士.
[42]刘海燕.基于纹理特性的物体外貌评价研究[D].浙江大学,光学工程,2014,硕士.
[43]曾顺丽.管理层权力视角下中国上市公司薪酬粘性实证研究[D].成都理工大学,企业管理,2013,硕士.
[44]陈桂明.印尼华裔学生的汉语环境及其对汉语学习的影响[D].广西师范大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[45]赵顺吉.山东靠山梆子音乐研究[D].天津音乐学院,音乐学,2013,硕士.
[46]李娟.中学生“工业旅游型”暑期社会实践模式研究[D].苏州大学,学科教学,2012,硕士.
[47]徐彬.新型碳纳米材料在电化学传感和超级电容器中的应用研究[D].华南理工大学,2011.
[48]史亚兵.E-反演半群上模糊同余的若干研究[D].兰州理工大学,基础数学,2013,硕士.
[49]胥萍.肺结核患者外周淋巴细胞亚群及协同刺激分子PD-1/PD-L1的表达特性与生物学意义[D].苏州大学,公共卫生（专业学位）,2012,硕士.
[50]胡建德,王光锷,陈乐寿,李维敏.大地电磁场二维正演计算中若干问题的讨论[J].石油地球物理勘探,1982,06:47-55+65.