苯扎氯铵致结膜下组织纤维化机制的研究

【摘要】目的：苯扎氯铵(benzalkoniumchloride,BAC)是滴眼液中最常用的防腐剂。大量临床及实验研究表明,长期使用含BAC的滴眼液会引起一系列的眼表不良反应。本研究主要探讨BAC致结膜下组织纤维化的机制。方法：SD雄性大鼠45只,随机分成对照组、实验组和细胞培养组,每组15只。对照组和实验组分别用PBS和0.01%BAC滴左眼,每天两次,每12小时一次。一个月后,取大鼠左眼球结膜组织提取蛋白和RNA及制备石蜡包埋切片；细胞培养组取大鼠左眼球结膜成纤维细胞(CFs)进行原代培养,分别用PBS、0.00005%BAC、0.000075%BAC、0.000075%BAC+LY2157299(TGF-PR1抑制剂,200μM、0.000075%BAC+NS-398(COX-2抑制剂,100μM)作用于细胞,24小时后提取蛋白和RNA。以WesternBlot(WB)和qRT-PCR方法检测结膜组织和原代培养的CFs的细胞外基质(I型胶原a1链,CollAl;纤维连接蛋白-1,FN-1),TGF-βp信号通路相关分子(TGF-β1>TGF-βR1>TGF-βR2>Smad2、Smad3.P-Smad3)和COX-2的蛋白及mRNA表达水平,并以苏木素-伊红染色法(H&E)、苦味酸-酸性品红染色法(VanGieson’s),过碘酸-希夫染色法(PAS)和免疫组织化学染色法观察结膜下组织的病理改变及炎症细胞的浸润情况。结果：H&E、VanGieson’s及PAS染色结果显示,0.01%BAC处理组球结膜上皮细胞及杯状细胞的形态和数量与PBS对照组相比无明显不同,但结膜下组织成纤维细胞密度轻微增加,有明显的胶原纤维沉积；免疫组织化学染色显示,0.01%BAC处理组球结膜下组织未见中性粒细胞和巨噬细胞浸润；WB和qRT-PCR结果显示,BAC处理组球结膜组织和原代培养的CFsCollAl>FN-1COX-2,TGF-β1>TGF-βRKSmad3,P-Smad3蛋白或mRNA的表达均显著高于PBS对照组,而TGF-βpR2和Smad2蛋白的表达与PBS对照组相比无明显差异；0.000075%BAC+LY2157299细胞处理组,P-Smad3、CollAl和FN-1的蛋白表达均显著低于0.000075%BAC处理组；0.000075%BAC+NS-398细胞处理组,TGF-β1>TGF-βR1、Smad3、P-Smad3蛋白表达均显著低于0.000075%BAC处理组。结论：BAC通过COX-2激活TGF-β1/Smad3信号通路,引起结膜下成纤维细胞产生大量细胞外基质从而引起结膜下组织纤维化。
【作者】黄彩虹；
【导师】陈永雄；
【作者基本信息】厦门大学，药理学，2014，硕士
【关键词】苯扎氯铵；结膜下组织纤维化；转化生长因子-β；环氧合酶-2；

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