拟穴青蟹卵黄蛋白原及其类似物的研究

【摘要】卵黄蛋白原(vitellogenin,Vg)广泛存在于卵生动物中,是卵黄磷蛋白(vitellin,Vn)的前体蛋白,而Vn则是卵黄蛋白(yolkprotein,YP)的主要成分。Vg是一种高分子量的含糖、磷、脂的蛋白,其最基本的功能是为胚胎发育提供营养物质和能量,此外Vg还具有运输脂类、参与免疫防御等多方面的功能。本课题组先前已克隆了拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)Vg(SpVg)的gDNA和cDNA全长序列,并且对SpVg进行了时空表达分析,因此本文在此基础上对SpVg进行了进一步的研究,主要结果如下：1)利用三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)Vn抗体,采用westernblot方法确定了雌性拟穴青蟹Vg/Vn蛋白的亚基组成,血淋巴Vg由约80kDa和207kDa两个亚基组成,卵巢Vn由约80kDa、100kDa和107kDa三个亚基组成。并且推测得到拟穴青蟹外源性Vg的剪切模式：约287kDa的SpVg在肝胰腺合成后,被类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-likeendoprotease)识别RERR保守基序,剪切得到约80kDa和207kDa大小两个亚基,它们随后被释放入血淋巴并被运输至卵巢,大亚基在卵巢中再一次被某种未知的蛋白酶剪切成约100kDa和107kDa两个小亚基,这样SpVg经过两次蛋白酶剪切最终形成含三个亚基的Vn。2)采用免疫组化和原位杂交法对雌性拟穴青蟹肝胰腺和卵巢中的Vg/Vn进行定位,结果显示卵巢的滤泡细胞和肝胰腺的腺管上皮细胞是Vg合成的场所。Vg蛋白最终被卵母细胞吸收,经过一系列的剪切加工后形成Vn,储存于卵黄颗粒中,为以后的胚胎发育提供营养物质。Vg通常被认为是雌性动物特有的蛋白,而雄性动物通过外界诱导也可产生,但有趣的是我们竟然在正常生理条件下的雄性拟穴青蟹生殖系统中发现Vg类似物(SpVg-like)的存在,并将其与雌蟹中的SpVg进行比较,主要内容如下：1)用分子生物学方法在精巢组织中克隆得到SpVg-like的cDNA全长序列(8316bp),并将其与从雌性青蟹中克隆得到的SpVg的gDNA和cDNA进行比较,发现SpVg-likecDNA与SpVgcDNA序列基本一致,但在5’端保留了SpVggDNA的前三个内含子,这种现象被称为内含子保留,是一种选择性剪接。2)在雄性拟穴青蟹各组织中对SpVg-likemRNA表达进行了检测,结果只有精巢有该基因的表达。3)利用三疣梭子蟹Vn抗体,采用westernblot方法在雄性拟穴青蟹的贮精囊中检测到了一条大小约210kDa的目的条带,我们认为它就是SpVg-like蛋白,并且发现它与雌蟹血淋巴检测到的SpVg蛋白大亚基的大小几乎相同,所以我们推测SpVg-like蛋白的序列可能与SpVg蛋白大亚基一致。4)采用免疫组化和原位杂交法在拟穴青蟹的精巢、贮精囊和纳精囊中分别对SpVg-like蛋白和SpVg-likemRNA进行定位。结果SpVg-like蛋白在这三个组织中的精子/精荚均可检测到,而SpVg-likemRNA却仅在精巢的精子中表达。说明SpVg-like蛋白在精巢的精子中表达合成后,一直储存在精子中,直到受精前都不被消耗利用,推测它可能与精子的最后成熟或受精过程相关。综上所述,本文从蛋白层面上丰富了SpVg的研究,另外还在雄性拟穴青蟹生殖系统中发现了SpVg类似物的存在,而这些都充实了对Vg的研究,并为深入了解Vg在生殖方面的作用奠定了基础。
【作者】郑碧琪；
【导师】叶海辉；
【作者基本信息】厦门大学，海洋生物学，2014，硕士
【关键词】拟穴青蟹；卵黄蛋白原；卵黄蛋白原类似物；雄性；定位；

【参考文献】
[1]董洪峰.情感诉求在饮品广告设计中的应用研究[D].吉林艺术学院,艺术设计,2012,硕士.
[2]王路鹏.基于重复控制原理的并联有源电力滤波器的研究与设计[D].上海电力学院,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[3]贾娜.三相感应耦合电能传输系统建模与电流平衡控制研究[D].中国矿业大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[4]叶宽,钟震,任天斌.导热硅脂研究进展[J].中国胶粘剂,2013,12:50-54.
[5]高妮娜.安康城市空间扩展及其绩效研究[D].西安建筑科技大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[6]邹雨枫.第三方物流T公司的合作伙伴关系管理研究[D].东华大学,物流工程（专业学位）,2014,硕士.
[7]崔苏,魏淮.用于高功率放大的光子晶体光纤特性研究[J].光电技术应用,2014,02:27-30+56.
[8]黄婧.粮食主产区农户耕地投入行为研究[D].湖南师范大学,土地资源管理,2014,硕士.
[9]储珺,杨樊,张桂梅,汪凌峰.一种分步的融合时空信息的背景建模[J].自动化学报,2014,04:731-743.
[10]丁瑞志.基于电力载波通信的路灯监控系统[D].北方工业大学,电气工程,2014,硕士.
[11]李艳君,吴铁军.求解混杂生产调度问题的嵌套混合蚁群算法(英文)[J].自动化学报,2003,01:95-101.
[12]姜华岩.多元化纠纷解决机制研究[D].山东大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[13]李军山.保险产品组合管理模型及其实证分析[D].江西财经大学,2004.
[14]唐欢.北大音乐研究会《音乐杂志》研究[D].湖南师范大学,音乐学,2014,硕士.
[15]康文祎.京陕文化视野下的叶广芩小说创作[D].聊城大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[16]王俊刚.高速公路桥头跳车交通影响分析与处治措施[D].吉林大学,交通运输工程,2012,硕士.
[17]游洁.大学生归因风格、价值观和寻求社会支持与帮助的关系研究[D].华中师范大学,基础心理学,2003,硕士.
[18]王海峰,胡德金.最小二乘支持向量机的一种稀疏化算法[J].计算机工程与应用,2005,33:72-74.
[19]宋宇辰,孟海东.基于DM的购物篮分析ES知识库构建[J].商场现代化,2005,11:152-153.
[20]黄文静.4-5岁儿童功能性便秘流行病学特点、相关因素及对心理行为的影响[D].青岛大学,药理学,2012,硕士.
[21]钱忠萍.非小细胞肺癌患者的T淋巴细胞亚群分析及相关因子的表达研究[D].苏州大学,免疫学,2014,硕士.
[22]韩晓红.从“笼中鸟”到“自由鸟”[D].内蒙古大学,英语语言文学,2014,硕士.
[23]包鸿敏.甲基丙烯醛一步氧化酯化催化剂的制备及性能研究[D].浙江大学,化学工程,2013,硕士.
[24]王一博,唐建候,杨慧珠.自适应小波方法求解波传问题[J].石油地球物理勘探,2005,06:15+628-631+731.
[25]代利祥.计算机仿真实验中的全局预测最优化序贯实验设计[D].华东师范大学,概率论与数理统计,2013,硕士.
[26]本报记者陈祎淼.产业化“破茧”石墨烯有望形成万亿产值[N].中国工业报,2013-07-24A03.
[27]李学进.九江市县级银行异地数据备份和恢复系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[28]鲍文,于达仁,王伟,徐志强.基于关联规则的火电厂传感器故障检测[J].中国电机工程学报,2003,12:173-177.
[29]刘国安.通用转矩测量系统的研究[D].浙江工业大学,2003.
[30]梁开健.一种效益型QoS参数匹配的估算方法[J].控制与决策,2010,06:903-906+915.
[31]张舒辰.实物期权法在环保工程类企业价值评估中的运用[D].北京交通大学,2014.
[32]杨洋.归化还是异化？[D].内蒙古师范大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[33]朱玉鹏.榆林市比亚迪光伏电站财务可行性研究[D].厦门大学,工商管理,2014,硕士.
[34]何文勇.基于光谱与纹理的高光谱影像半监督降维与融合研究[D].上海大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[35]于恩萍.论韩愈文学思想中的生命意识[D].新疆师范大学,中国古代文学,2004,硕士.
[36]方达峰,陈希,陈晖,陈瑶,王颖,朱赟婕,戴万明,余静,林小龙.学龄前儿童乳牙患龋的ICDAS系统评估[J].浙江预防医学,2014,05:442-445.
[37]杨曌照.基于轨道交通换乘的公共自行车租赁点选址与需求研究[D].华南理工大学,交通运输规划与管理,2014,硕士.
[38]李群善.寒冷地区高速公路边坡生态防护与服务区节能环保技术[D].长安大学,道路与铁道工程,2014,硕士.
[39]巫蓓.我国南海海域的海运安全评价[D].大连海事大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[40]吴雪,沈俊海,陈海峰,李良超,李涓碧,丁艳.聚吡咯/碳纳米管复合物的制备及电性能研究[J].原子与分子物理学报,2014,06:1000-1008.
[41]江蓉.GaN基发光二极管电流输运与电致发光特性的研究[D].南京大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[42]李宁.对外汉语初级口语教材练习研究[D].内蒙古师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[43]柳杜娟.2010上海世博会期间大气细粒子中硝基多环芳烃的研究与比较[D].上海大学,应用化学,2013,硕士.
[44]翟江丽,郝俊兴.聚苯胺-石墨烯修饰玻碳电极同时测定邻苯二酚和对苯二酚[J].分析科学学报,2015,03:384-388.
[45]李治纬.弹拨手法结合关节松动术治疗肩周炎的临床研究[D].广州中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[46]毕亚林.中国国际海洋事务的话语权问题研究[D].中国海洋大学,行政管理（专业学位）,2014,硕士.
[47]黄丽.柑橘黄龙病LAMP检测方法的建立及病原菌亚洲种种群分化研究[D].西南大学,微生物学,2013,硕士.
[48]何方.城市供水供暖计算机无线调度系统的研究[D].沈阳工业大学,电气工程,2003,硕士.
[49]许绍香.白牡丹工艺优化与香气分析研究[D].中国农业科学院,园艺（专业学位）,2012,硕士.
[50]胡云,冯国东,许彬,刘朋,周永红.增塑剂乙酰聚合甘油不饱和脂肪酸多酯的合成及应用[J].高分子材料科学与工程.