全二维HSCCC×HPLC色谱系统的构建和应用

【摘要】本文旨在构建高速逆流色谱(HSCCC)与制备液相色谱(prep-HPLC)在线二维联用的系统与方法。首先,针对逆流色谱与制备液相色谱流动相不兼容的问题,设计了用于连接二者的流动相稀释-固相捕集接口。该接口先对第一维逆流色谱洗脱液进行稀释,然后在电控二位十通阀的控制下,采用两个富集柱交替对稀释液进行富集,进而分段送入制备型高效液相色谱,从而实现了HSCCC与HPLC的全二维在线联用。本文对该接口中关键的富集柱及稀释工作参数进行了系统的考察与优化,最终确定CCC上样量100mg,15mm×30mmi.d.的C18预柱作为富集柱,4倍水稀释,动态混合器为接口的工作参数。进而用蟾酥甲醇提取物验证该HSCCCxHPLC全二维液相系统的分离能力,第一维HSCCC采用流速控制的工作方式,实现与第二维HPLC分离时间的匹配。应用该系统在8个小时内,一次性从100mg的蟾酥甲醇提取物中分离得到一个生物碱和11个强心甾类化合物,分别为：蟾毒哌啶酸(1,3.6mg,99.9%)、去乙酰蟾蜍它灵(2,5.8mg,90.6%)、日蟾毒它灵(3,2.7mg,99.7%)、de-O-acetylcinobufotalin(4,1.5mg,77.7%)、沙蟾毒精(5,2.8mg,99.9%)、远华蟾毒精(6,1.5mg,99.9%)、去乙酰华蟾毒精(7,1.9mg,90.4%)、蟾毒它灵(8,3.6mg,99.9%)、华蟾毒它灵(9,6.1mg,52.3%)、蟾毒灵(10,4.8mg,99.9%)、华蟾毒灵(11,3.5mg,99.3%)、脂蟾毒配基(12,4.1mg,85.0%)。显示了很好的分离效果和峰容量。该HSCCCxHPLC系统还应用于白花前胡提取物的分离,在4个小时内一次性从1000mg白花前胡乙醇提取物中得到11个化合物,分别是为：花椒毒素(1,3.7mg,90.2%)、异茴芹内酯(2,1.5mg,93.1%)、d-laserpitin(3,4.3mg,96.2%)、Pd-Ib(4,19.7mg,90.2%)、白花前胡甲素(5,167mg,90.2%)、Nodakenetintiglate(6,3.1mg,90.2%)、corymbocoumarin(7,3.5mg,90.2%)、紫花前胡醇当归酯(8,4.1mg,90.2%)、紫花前胡醇当归酯(9,2.1mg,90.2%)、前胡香豆素B(10,12.1mg,90.2%)、前胡香豆素E(11,30.3mg,90.2%)。综上所述,本文设计了一种新的全二维HSCCC×HPLC仪器系统,基于该系统成功实现对中药蟾酥和白花前胡提取物的一步式分离制备。显示该系统能够充分利用CCC与HPLC的分离机制的差异,能够对复杂天然产物进行快速、高效的分离制备,从而加速天然产物结构研究的进程。
【作者】张玲玲；
【导师】丘鹰昆；吴振；
【作者基本信息】厦门大学，药物化学，2014，硕士
【关键词】高速逆流色谱全二维制备液相稀释式富集柱接口；

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