多房棘球绦虫Sox2基因的克隆与功能鉴定

【摘要】多房棘球绦虫中绦期幼虫(泡球蚴)在人体内以类似肿瘤的方式不断增殖发育,引起严重的人兽共患泡球蚴病。泡球蚴生发层细胞属于全能成体干细胞,具有自我更新和分化能力,是其不断增殖发育的基础。Sox2是哺乳动物胚胎干细胞核心转录因子之一,对干细胞多潜能性的维持起关键作用。本文运用RACE技术克隆得到编码多房棘球绦虫SOX2可能同源基因的全长序列,命名为EmSOX2;运用生物信息学分析其基因结构和功能域,构建原核表达载体,制备多克隆抗体,结合免疫印迹、RT-PCR、实时荧光定量PCR、体外真核表达和免疫组化等方法对EmSOX2表达和定位进行了研究；利用iPS技术,研究EmSOX2在胚胎干细胞多潜能性维持中的作用。主要结果如下：(1)EmSOX2基因全长为1422bp,包括70bp的3’UTR和29bp的5’UTR,含一个长为138bp的内含子,编码阅读框为1185bp;EmSOX2基因只存在一种转录形式,编码394个氨基酸,其HMGbox保守功能区域与其他生物的Sox2的HMGbox区域相似度达90%以上。(2)EmSOX2蛋白的表达主要定位于泡球蚴生发层细胞的细胞核中：EmSOX2表达定位于真核细胞的细胞核中；实时荧光定量PCR与WesternBlot结果表明：EmSOX2蛋白在囊泡的表达量明显高于原头节。(3)iPS诱导技术的结果表明：EmSOX2可替代小鼠外源Sox2,与小鼠的外源Oct4、c-Myc及Klf共感染小鼠胚胎成纤维细胞后,可以将其诱导成iPS细胞。综上所述,本文对泡状棘球蚴Sox2可能同源基因EmSOX2进行了克隆与功能鉴定,得到了EmSOX2全长序列,发现EmSOX2蛋白在泡球蚴生发层细胞中高表达,且对于维持小鼠胚胎干细胞的多潜能性起关键作用,与小鼠Sox2功能类似,提示EmSOX2为哺乳类Sox2的功能同源基因。此研究将有助于了解维持泡球蚴生发层多能性的内源因子及其作用机制,发现新的药物靶点,为研发新型抗泡球蚴药物提供理论依据。
【作者】武坚坚；
【导师】王彦海；
【作者基本信息】厦门大学，动物学，2014，硕士
【关键词】泡球蚴；Sox2；iPS诱导；

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