ERK1/2信号传导通路在逆转肝癌细胞耐药性中的作用研究

【摘要】目的：1.检测肝癌细胞耐药株模型的耐药性。2.检测ERK1/2信号通路的特异性抑制剂索拉菲尼和PD98059对肝癌耐药细胞株耐药性的影响,以明确下调ERK1/2活性是否可以逆转肝癌细胞耐药性。3.检测经典耐药逆转剂环孢霉素A对ERK1和ERK2表达水平的影响,初步探索ERK1/2信号通路与逆转肝癌细胞耐药性之间的关系。方法：1.使用阿霉素对人肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7402进行大剂量冲击方法诱导得到肝癌耐药株模型。采用Celltiter-Glo荧光细胞活性检测方法进行药敏实验并计算耐药指数,确定耐药细胞株的耐药性。2.用MTT法检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A对肝癌细胞的毒性。3.WesternBlot检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A作用后耐药细胞ERK1、ERK2表达水平的变化情况。4.采用Celltiter-Glo荧光细胞活性检测方法检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A作用后耐药细胞株对阿霉素敏感性的变化情况。结果：1.阿霉素诱导得到肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM和BEL-7402/ADM。与亲本株相比,耐药细胞株对阿霉素的敏感性明显下降,阿霉素的半数抑制浓度(IC50)显著升高。SMMC-7721/ADM及BEL-7402/ADM的耐药指数分别为16.44、20.34。2.索拉菲尼及PD98059分别作用于耐药细胞株后,ERK1、ERK2的总表达水平无变化,磷酸化水平显著降低,且药物的作用浓度越高,效果越明显。与对照组相比,索拉菲尼及PD98059均提高了耐药细胞株对阿霉素的敏感性。3.与对照组相比,经环孢霉素A作用后,耐药细胞株对阿霉素的敏感性明显提高。环孢霉素A对耐药细胞ERK1、ERK2的总表达水平无影响,但ERK1、ERK2磷酸化水平有所提高。结论：1.诱导得到的耐药株SMMC-7721/ADM和BEL-7402/ADM表现出稳定的耐药性。2.通过下调ERK1/2活性可以逆转肝癌耐药细胞株的耐药性。3.ERK1/ERK2磷酸化水平降低并未参与环孢霉素A对肝癌细胞的耐药逆转作用。下调ERK1/2信号通路活性并不是逆转肝癌细胞耐药的唯一途径。
【作者】陈思媛；
【导师】潘超；
【作者基本信息】厦门大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】肝细胞癌；多药耐药；ERK1/2；逆转；

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