GNAO1与胃癌预后的关系及其分子机制研究

【摘要】研究背景及目的：探讨胃癌的早期诊断与其发生机制具有重要意义,因为早期胃癌患者缺乏特异症状和体征,而中晚期胃癌患者术后的5年生存率又比较低并且预后较差,因此,有最新研究使用错配修复检测技术和互补方法,发现了几种人类癌症中的体细胞突变,其中包括G蛋白偶联受体通路中的一个突变基因——G蛋白亚基基因GNAO1,并有研究表明GNAO1的突变或表达降低与乳腺癌、肝癌等的发生有关。目前,有关GNAO1基因与其表达蛋白Gao在胃癌组织中的表达情况,以及在胃癌发生发展过程中,Gao蛋白与胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭、衰老等生物学特性的相关性方面的研究,迄今为止国内外均尚未见有文献报道。本研究旨在研究GNAO1与胃癌预后的关系及其对胃癌细胞增殖、衰老、凋亡、迁移等生物学特性的影响及可能的作用信号通路,进而阐述其在胃癌发生、发展过程中的作用及意义。方法：免疫组织化学法检测GNAO1在胃癌及癌旁组织中的表达差异情况；Kaplan-Meier法对GNAO1阴性和阳性表达患者进行生存分析,并用Cox回归分析法评估胃癌预后相关因素及其独立性；转染小干扰RNA(siRNA)干扰GNAO1基因的表达；CCK8细胞增殖实验和克隆形成实验研究干扰GNAO1后对人胃癌细胞系(AGS和MGC-803)的增殖抑制作用；通过流式细胞术评定细胞凋亡程度及细胞周期水平；通过划痕试验研究细胞的迁移能力；通过衰老相关beta-gal染色检测细胞衰老特征；并使用western-blot检测了凋亡相关蛋白及相关通路蛋白表达的水平。结果：1.免疫组化结果显示GNAO1在44例胃癌组织中(44/70,62.9%)高表达,在癌旁组织中不表达。2.GNAO1高表达与胃癌预后不良相关。3.CCK8增殖实验和克隆形成实验结果均显示：与阴性对照组相比,干扰GNAO1后可显著抑制胃癌细胞增殖,且与时间呈正相关。4.通过流式细胞术观察到：GNAO1干扰组比阴性对照组检测到更多的凋亡细胞,但未检测到其有明显的周期改变。5.划痕试验显示：干扰GNAO1能在一定程度上抑制肿瘤细胞的迁移。6.衰老相关Beta-gal染色实验显示,干扰RNA处理后,胃癌细胞衰老染色阳性率较阴性对照组有所提高。7.Western-blot结果显示与阴性对照组相比,干扰RNA处理后胃癌中凋亡相关蛋白puma、Bim及PARP水平明显增高,ERK1/2表达降低。结论：本研究首次研究了GNAO1在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌预后的关系,并发现了其可通过ERK信号通路抑制胃癌细胞的凋亡,进而促进胃癌增殖。另研究发现GNAO1在胃癌细胞的迁移和衰老过程中起到一定的作用。
【作者】刘振；
【导师】张鸣青；
【作者基本信息】厦门大学，内科学，2014，硕士
【关键词】胃癌；GNAO1；预后；

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