何首乌饮对运动性疲劳大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

【摘要】运动性疲劳(Exercise-inducedFatigue)是人体经过长时间的运动后,出现的运动能力暂时下降,机体生理过程和心理过程不能持续其机能在特定水平上和维持预定的运动强度,使身体器官、系统功能失调,从而导致运动能力下降的一种状态。在竞技体育飞速发展的今天,比赛日益激烈,许多项目的世界记录己达到或接近人体极限水平,为了取得好的成绩,运动员在运动训练过程中承受的负荷越来越高,使机体不能适应而导致运动性疲劳。有效及时消除和缓解运动性疲劳,对于提高运动员训练效果至关重要。中医药在提高运动能力、延缓疲劳方面的研究越来越为运动医学界所关注。本研究对运动性疲劳大鼠进行中药干预,观察其对运动性疲劳大鼠的血清睾酮、尿素氮、乳酸及睾丸组织17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)的表达影响。为进一步研究中药抗运动性疲劳作用机理奠定理论和实验基础。目的：采用生物化学、免疫组织化学、RT-PCR和WesternBlotting方法,通过检测各组大鼠血清尿素氮、乳酸和睾酮的含量,睾丸组织17β-HSD的表达,探讨何首乌饮缓解运动性疲劳的机制。方法：1.实验动物的选择：选用8周龄清洁级SD(Sprague-Dawley,SD)雄性大鼠75只,体重为180～200g。2.建立运动性疲劳动物模型：游泳桶呈圆形,内壁光滑,直径50cm,水深70cm,水温30℃±2℃。第一周进行适应性游泳训练,第1d游泳30min,此后逐日按40%幅度增加,至第7天游泳2h；第二周开始适应性负重游泳训练,第一次负自身体重的0.5%,此后逐日递增,负1%、2%、3%、4%每次游泳2h,当负重增加到5%时,游泳时间明显缩短,所以选择4%作为最终负重量；然后进行游泳力竭实验(游泳力竭标准为大鼠从水面下沉,经10s后仍不能返回水面),游泳力竭实验每天1次,连续42d。3.动物分组：将大鼠随机分为5组,安静对照组(N组)、安静何首乌饮组(HA组)、模型组(M组)和何首乌饮治疗组(HT组),何首乌饮预防组(HP),每组15只。N组、HA组大鼠不进行游泳训练,每天分别灌胃等量生理盐水和何首乌饮(20g/kg/d)。M组、HT组和HP组大鼠每天下午进行游泳训练复制运动性疲劳模型,其中,HP组大鼠每天上午灌胃何首乌饮(20g/kg/d)进行预防,下午进行游泳训练,连续42d。在造模的第42d各组大鼠经内眦眶后静脉取血约1.5mL,离心取上清,检测血尿素氮、血乳酸、血清睾酮,判断造模是否成功。判断标准：与安静对照组比较模型组大鼠血尿素氮和血乳酸明显升高,血清睾酮明显降低,表明模型建立成功。M组、HT组在模型成功后,HT组灌胃何首乌饮(20g/kg/d)进行治疗,M组灌胃等量的生理盐水,连续42d。N组、HA组和HP组大鼠,自由进食,饮水42d。4.标本采集与处理：实验结束后,各组大鼠用10%水合氯醛麻醉,经内眦眶后静脉取血约1.5ml,1000r/min离心20mmin,吸取上清液置-80℃低温冰箱保存,分别检测血清睾酮、血尿素氮、血乳酸的浓度。然后经左心室向升主动脉插管快速灌注预冷的DEPC处理的生理盐水约250m1直至流出的液体变清为止,迅速取左侧睾丸组织投入液氮中,30mmin后移到80℃保存,以备用作Westernblotting、RT-PCR测定。右侧睾丸组织经4%多聚甲醛灌注固定、石蜡包埋以备用作免疫组织化学染色。结果：1.大鼠体重的变化模型组大鼠与安静对照组大鼠相比统计学差异明显(P<0.01)；何首乌饮用药组大鼠比模型组大鼠体重统计学差异明显(P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比体重无显著差异(P>0.05)。2.血清尿素氮模型组大鼠与安静对照组大鼠相比统计学差异明显(P<0.01)；何首乌饮用药组大鼠比模型组大鼠血清尿素氮统计学差异明显(P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比血清尿素氮无显著差异(P>0.05)。3.血乳酸模型组大鼠与安静对照组大鼠相比血乳酸统计学差异明显(P<0.01)；何首乌饮用药组大鼠比模型组大鼠血乳酸统计学差异明显(P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比血乳酸无显著差异(P>0.05)。4.血清睾酮模型组大鼠与安静对照组大鼠相比血清睾酮统计学差异明显(P<0.01)；何首乌饮用药组大鼠比模型组大鼠血清睾酮统计学差异明显P<0.05)；预防组大鼠与治疗组大鼠相比血清睾酮差异无统计学意义(P>0.05)。5.17β-羟类固醇脱氢酶免疫组化染色表明,17β-HSD的阳性信号定位在睾丸间质细胞胞质、胞核内,为棕色颗粒。免疫组化、Westernblotting、RT-PCR检测结果,模型组大鼠睾丸组织表达与正常组比较明显减少(P<0.01)；何首乌饮治疗组、预防组大鼠表达强于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)；预防组与治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.成功的建立了运动性疲劳大鼠模型。2.何首乌饮能够提高运动性疲劳大鼠血清睾酮的浓度。3.何首乌饮能够显著降低运动性疲劳大鼠血清尿素氮和乳酸浓度。4.何首乌饮能够提高运动性疲劳大鼠睾丸组织17β-HSD的表达。
【作者】郭银；
【导师】牛嗣云；高福禄；
【作者基本信息】承德医学院，人体解剖与组织胚胎学，2011，硕士
【关键词】何首乌饮；运动性疲劳；血尿素氮；血乳酸；血清睾酮；17β-羟类固醇脱氢酶；

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