大肠杆菌O157:H7毒力蛋白NleB1,NleB2对NF-κB信号通路的影响

【摘要】肠出血性大肠杆菌0157：H7是一种危害严重的肠道致病菌,0157：H7属于胞外菌,主要利用Ⅲ型分泌系统(T3SS)将毒力蛋白直接注入宿主细胞内,通过影响宿主细胞的各项生理功能,如改变细胞代谢情况、调节免疫应答、影响细胞内信号通路等,从而达到侵染宿主的目的。目前,利用生物信息学的方法分析EHECO157:H7存在62个毒力蛋白,经实验验证的有39个,其中NleE,NleC,N1eH等毒力蛋白的致病机制研究的比较透彻,它们分别通过在不同程度上影响宿主体内的NF-κB、MAPK、泛素、细胞凋亡等信号通路,从而产生致病性,然而对于EHECO157:H7毒力蛋白NleB的研究还处于初始阶段,研究其致病机制对于探索O157：H7的致病性具有深远意义。肠出血性大肠杆菌EHECO157:H7的毒力蛋白NleB存在两个家族成员：NleB1、NleB2(其中NleB1是经实验验证的毒力蛋白,NleB2未经实验验证),而且经实验证实都是可以转录和表达的。与EHEC亲缘关系相近的肠致病性大肠杆菌(enteropathogenicEscherichiacoli;EPEC)和柠檬酸杆菌(Citrobacterrodentium)只含有一个NleB毒力蛋白,C.rodentium的毒力蛋白NleB具有N-乙酰葡糖胺转移酶活性,它可以对GAPDH进行0连接的N乙酰葡糖胺糖基化修饰,从而破坏了GAPDH与TRAF2的相互作用,进而抑制了TRAF2的多聚泛素化和NF-κB的活性。经基因序列比对,发现肠出血性大肠杆菌EHECO157:H7的毒力蛋白NleB1与柠檬酸杆菌(Citrobacterrodentium)的NleB碱基序列相似度为89%,这为我们进一步探讨O157：H7的毒力蛋白NleB1、NleB2对NF-κB信号通路的作用及作用机制奠定了基础。利用Real-timePCR方法对nleB1和nleB2转录水平评价分析,证明了nleB1和nleB2在天然菌株中都可以转录,且NleB2的表达量是NleB1的约0.0076倍,差异显著。为了进一步深入探讨EHECO157:H7毒力蛋白NleB的功能和致病机制,我们利用λRed重组法构建了nleB1,nleB2基因敲除株。毒力评价分析得出：敲除株与野生株相比,在LB培养基中的生长速度无显著变化,在DMEM培养基中生长速度要快；基因敲除前后对HeLa粘附细胞数目无显著的影响；利用野生株和敲除株侵染HeLα细胞,用TNF-α刺激,ELISA检测IL-8的水平,发现敲除后IL-8的表达水平上调。通过构建pAcGFP-nleBl,pAcGFP-nleB2,检测nleBl,nleB2对NF-κB信号通路的影响,发现nleBl,nleB2均可以抑制TNF-α激活的NF-κB信号通路,但是对IL-1p激活的NF-κB信号通路无抑制作用。本研究构建了nleB1,nleB2基因敲除株,并对其进行了初步的毒力评价分析,通过双荧光检测系统证明了nleB1,nleB2对TNF-α激活的NF-κB信号通路有抑制作用,但是对IL-1β激活的NF-κB信号通路无抑制作用。以上实验为下一步研究NleB1、NleB2蛋白的功能,以及阐明肠出血性大肠杆菌O157：H7的致病机制奠定了基础。
【作者】陈欣欣；
【导师】梁龙；
【作者基本信息】安徽大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】肠出血性大肠杆菌；O157:H7；Ⅲ型分泌系统；NleB基因敲除；NF-κB；

【参考文献】
[1]高彤鼎.条件接收的认识误区[J].广播与电视技术.2005(08)
[2]韩新令.黄芪减轻胆管梗阻所致肝纤维化的研究[D].滨州医学院,小儿外科学,2011,硕士.
[3]郝志凯,王硕,谭民.基于优化策略的混合定位算法[J].自动化学报,2010,05:711-719.
[4]黄勇博.中小型高新技术企业财务控制模式及方法研究[D].北方工业大学,工商管理,2014,硕士.
[5]张涛.移动广告联盟信息平台构建研究[D].哈尔滨理工大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[6]赵国有.基于咔唑衍生物离子受体的合成及识别研究[D].渤海大学,有机化学,2013,硕士.
[7]冯丽,邱家驹.离群数据挖掘及其在电力负荷预测中的应用[J].电力系统自动化,2004,11:41-44+86.
[8]祝勇仁.基于成组技术的锅炉压力容器CAPP开发平台的研究[D].浙江工业大学,化工过程机械,2004,硕士.
[9]曲宏.实现证券集中交易的五大意义及四大风险[N].中国计算机报,2003-01-20B02.
[10]金皖豫,李铭,何杨辉,杜正刚,邵钧炯,张国栋,周灵燕,周旭辉.不同施氮水平对冬小麦生长期土壤呼吸的影响[J].植物生态学报,2015,03:249-257.
[11]刘鑫.MIMO-OFDM系统盲信道估计算法研究[D].西安科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[12]崔全章,孙增玖.海拉尔盆地贝尔凹陷断裂特征与油气富集规律[J].石油地球物理勘探,2005,S1:82-85+107+138.
[13]马飞飞.孤儿作品的著作权保护和利用研究[D].西南政法大学,知识产权法（专业学位）,2012,硕士.
[14]卢金芳.一类滞后型泛函微分方程的Φ-变差稳定性[D].西北师范大学,应用数学,2013,硕士.
[15]张文静.金属橡胶密封件泄漏率分析及试验研究[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2014,硕士.
[16]陈丹.石墨烯量子点“一步到位”[N].中国纺织报,2012-01-19003.
[17]许杉.沉积物中砷的赋存形态及其环境化学特征[D].中国地质大学（北京）,环境工程,2012,硕士.
[18]李佳.包头市初中校农民工子女心理健康教育问题及教育策略[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[19]刘仁武,陈浩林,刘军,倪成洲,刘原英.极浅水域地震采集气枪震源设计与应用[J].石油地球物理勘探,2010,04:478-481+624+463.
[20]邢长明,刘方爱.基于强化学习的适应性微粒群算法[J].控制与决策,2011,01:54-58+64.
[21]周刘备.唐代诗人眼中的汉代边疆问题[D].华中师范大学,中国古代史,2014,硕士.
[22]何立宝.深圳市HD科技有限公司员工满意度实证研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[23]李强.云南省太阳能发电产业发展战略研究[D].云南大学,工商管理,2012,硕士.
[24]王蕊.火电机组一次调频特性的分析及仿真研究[D].北京交通大学,2009.
[25]王玉太,张明君,刁希全,李进凯.山东省小水源工程建设的基本经验[J].中国水利.2003(08)
[26]刘莉.控制系统计算机辅助工程网络化软件设计与开发[D].华北电力大学（河北）,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[27]王宇辉.HO-1对氧化损伤AEC-Ⅱ凋亡及AQP-1表达的影响[D].遵义医学院,麻醉学（专业学位）,2012,硕士.
[28]胡挺.安徽省立图书馆之文化作为研究[D].安徽大学,历史学,2013,硕士.
[29]冯峻.制度创新视域下我国民间组织的发展问题研究[D].山西师范大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[30]胡菊勇.银行结构与中小企业融资[D].浙江工业大学,技术经济及管理,2004,硕士.
[31]皇甫冰.对抗生素滥用问题的立法研究[D].西南政法大学,行政法学（专业学位）,2012,硕士.
[32]仇潇潇.具有密度限制的捕食动力系统的定性研究[D].宁波大学,基础数学,2013,硕士.
[33]郑羿方.基于正面碰撞的大客车车身结构动力修改[D].长安大学,车辆工程,2014,硕士.
[34]秦颖.构建城市开放空间的可持续生产性景观[D].山东师范大学,设计艺术学,2013,硕士.
[35]徐志江,凌晓,王亢,孟利民.二进制差分随机过程键控的结构与性能分析[J].通信学报,2014,12:178-189.
[36]周弃疾.塞内加尔KOLDA道路项目管理研究[D].西南交通大学,项目管理,2012,硕士.
[37]司录荣.轴向柱塞泵的有限元分析及壳体的优化设计[D].中北大学,机械工程,2014,硕士.
[38]王玉红.从认知诗学角度解读《船讯》[D].南昌大学,英语语言文学,2012,硕士.
[39]马占飞,郑雪峰,曾广平,涂序彦.“软件人”群在入侵检测系统中的协调控制[J].控制与决策,2008,08:944-948.
[40]董敏.我国上市银行收入结构转型问题研究[D].山西财经大学,金融学,2013,硕士.
[41]李拓.移动agent在电子商务中的应用[D].西安建筑科技大学,2005.
[42]刘金周.我国物价波动名义和实际影响因素的计量研究[D].吉林大学,数量经济学,2013,硕士.
[43]何荣华.多晶硅薄膜晶体管的串联电阻模型[D].苏州大学,集成电路工程（专业学位）,2013,硕士.
[44]刘亮.拒绝条款缘何难以保障“拒绝”——对《行政处罚法》第49条、第56条的分析[J].北京政法职业学院学报,2014,03:43-48.
[45]杨乔木.远大航空工业公司发展战略研究[D].湖南大学,工商管理,2011,硕士.
[46]段金娟,马彧,刘洪彩.技艺相合,古今交汇——城市公共环境设施的地域性设计研究[J].艺术百家,2013,S2:177-179.
[47]熊耀清.密肋复合墙体损伤演化规律及损伤模型研究[D].北京交通大学,2008.
[48]张忠磊.论魏晋南北朝旌表制度[D].山东师范大学,中国古代史,2013,硕士.
[49]庞景辉.含电解质溶液相平衡计算[D].中国海洋大学,化学工程,2014,硕士.
[50]匡凯英.血清ANCA检测在结缔组织病与皮肤血管炎中的临床意义探讨[D].浙江大学,皮肤病与性病学,2004,硕士.