团头鲂HEPCIDIN基因的克隆、表达及生物活性分析

【摘要】Hepcidin,又称铁调素,是一类重要的抗菌肽,不仅具有广谱的抗细菌、病毒、肿瘤细胞等作用,还是参与机体铁调节的关键因子。本实验通过PCR技术获得了团头鲂Hepcidin的cDNA核心序列,并分析了该基因的分子特征及组织表达特征；采用基因重组技术,将团头鲂Hepcidin基因的开放阅读框ORF区分别连接到原核表达载体和真核表达载体中,得到pGEX-KG-Hepcidin和pPICZaA-Hepcidin重组表达质粒,并且分别在大肠杆菌(BL21)和毕赤酵母(GS115)中诱导表达目的蛋白；对团头鲂进行嗜水气单胞菌攻毒试验,分别在攻毒后4h、8h、12h、24h、48h、72h取样,检测肝脏、脾脏、头肾和前肠组织中Hepcidin基因表达量的变化。同时测定血清铁和肝脏组织铁的变化量。结果显示：1.团头鲂Hepcidin基因ORF区为282bp,编码93个氨基酸,信号肽、前肽和成熟肽分别由24、44、25个氨基酸组成。成熟肽N端有典型的Q-S/I-H-L/I-S/A-L序列,C端有保守的8个半胱氨酸残基。2.构建的pGEX-KG-Hepcidin重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达了含GST标签的融合蛋白,表达的目的蛋白以包涵体和可溶性蛋白的形式存在。构建的pPICZaA-Hepcidin重组表达质粒电转至毕赤酵母GS115中,对阳性菌株进行了诱导表达,表达的目的蛋白对金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌有较好的抑菌活性。3.Hepcidin基因在团头鲂各组织中广泛存在,在肝脏中含量最高,头肾、脾脏次之。嗜水气单胞菌攻毒后,脾脏和前肠中Hepcidin表达量呈现先上升后下降的变化趋势,血清铁含量有所下降,组织铁含量先下降后上升。推测这可能是细菌感染后,机体通过降低循环铁的量来控制细菌对铁利用的一种自我保护机制。
【作者】陈思思；
【导师】袁改玲；
【作者基本信息】华中农业大学，水产养殖，2014，硕士
【关键词】团头鲂；Hepcidin(铁调素)；重组表达；细菌感染；铁调节；

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