APR3、NFκB/p65及NFAT3在卵巢癌的表达及其相关性分析

【摘要】目的：1.研究凋亡相关蛋白3（APR3）、核转录因子κB/p65（NFκB/p65）、活化T细胞核因子3（NFAT3）在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达情况及其与卵巢癌临床病理特征的关系，初步探讨其在卵巢肿瘤发生、发展及预后中的作用。2.通过分析APR3、NFκB/p65以及NFAT3在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株表达的相关性，进一步探讨卵巢癌的发生机制。3.通过抗肿瘤药物干预肿瘤细胞株的实验，获得APR3基因与卵巢癌细胞生长的相关性证据，有助于APR3因子的临床研究，为卵巢癌分子治疗的进一步研究提供一个新的思路。材料与方法：1.采用免疫组织化学方法（S-P法），研究APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白在60例卵巢癌组织、18例交界性和37例良性卵巢肿瘤中的表达情况。2.以不同浓度的顺铂分别作用于人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO，用MTT法分别检测不同浓度顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO的增殖抑制率。3.采用免疫细胞化学方法检测顺铂作用前、后APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白在人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO中的表达情况。4.采用westernblot方法检测顺铂作用前、后APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白在人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO中的表达情况。结果：1.卵巢癌组织中APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白的表达：（1）APR3蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率70.0%，显著高于卵巢交界性肿瘤（55.6%）和卵巢上皮性良性肿瘤（43.2%），差异有显著性（P<0.05）；APR3表达与组织分化程度、临床分期、腹腔脏器和淋巴转移及腹水有关；APR3的阳性表达率随着卵巢癌组织分化程度的降低而显著增高（P<0.05），临床分期越晚表达越高（P<0.05），有腹腔脏器及淋巴转移者阳性表达率比无腹腔脏器及淋巴转移者高（P<0.05），有腹水者比无腹水者高（P<0.05）。（2）NFκB/p65蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率61.7%，显著高于卵巢交界性肿瘤（38.9%）和卵巢上皮性良性肿瘤（29.7%），差异有显著性（P<0.05）；NFκB/p65表达与组织分化程度、临床分期、腹腔脏器和淋巴结转移及腹水有关：组织分化越低，其表达越高（P<0.05）；临床分期晚期比早期的阳性表达率高（P<0.05）。有腹腔脏器和淋巴结转移者的阳性表达率高于无转移者（P<0.05）；有腹水者的阳性表达率比无腹水者高（P<0.05）。（3）NFAT3蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率50.0%，显著高于卵巢交界性肿瘤（27.8%）和卵巢上皮性良性肿瘤（18.9%），差异有显著性（P<0.05）；NFAT3与组织分化程度、临床分期及腹腔脏器和淋巴结转移均有关，组织分化越低，其表达越高（P<0.05）；临床分期晚期比早期的阳性表达率高（P<0.05）。有腹腔脏器和淋巴结转移者的阳性表达率高于无转移者（P<0.05），但与腹水无关(P＞0.05)。（4）APR3、NFκB/p65、NFAT3表达与卵巢癌组织学类型和患者年龄均无关(P＞0.05)。2.APR3蛋白与NFκB/p65蛋白的表达呈正相关（r=0.382，P<0.05）；而APR3蛋白与NFAT3蛋白之间以及NFκB/p65蛋白与NFAT3蛋白之间均无相关性（P<0.05）。3.顺铂对卵巢癌SKOV3和3AO细胞增殖的影响：在1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml和30μg/ml这五个浓度范围内，顺铂对卵巢癌SKOV3和3AO细胞生长抑制具有时间和浓度依赖性（P<0.05）。4.免疫细胞化学方法分析APR3、NFκB/p65、NFAT3在卵巢癌SKOV3和3AO细胞中均有表达。经顺铂作用24小时后，表达均降低。5.Westernblot分析结果显示经顺铂（10μg/ml）处理24小时后，卵巢癌SKOV3和3AO细胞APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白表达均减弱。在经药物处理前后的卵巢癌SKOV3、3AO细胞中APR3蛋白条带的平均相对灰度值分别为0.976±0.042,0.406±0.012（P<0.05）与1.205±0.021,0.560±0.036（P<0.05）；NFκB/p65蛋白条带的平均相对灰度值分别为1.094±0.074,0.954±0.046（P<0.05）与1.106±0.072,0.904±0.050（P<0.05）；NFAT3蛋白条带的平均相对灰度值分别为0.614±0.046,0.135±0.004（P<0.05）与0.606±0.208,0.019±0.006（P<0.05）；未经任何处理的人卵巢癌SKOV3和3AO细胞中APR3蛋白条带相对灰度值相比较差异有统计学意义，而未经任何处理的人卵巢癌SKOV3和3AO细胞中NFκB/p65蛋白条带相对灰度值相比较与人卵巢癌SKOV3和3AO细胞中NFAT3蛋白条带相对灰度值相比较差异均无统计学意义；人卵巢癌SKOV3细胞中APR3与NFκB/p65表达（r=0.949）、APR3与NFAT3表达（r=0.985）和NFκB/p65与NFAT3表达（r=0.988）均呈正相关(P＜0.05)；人卵巢癌3AO细胞中NFkB/p65与NFAT3表达呈正相关(r=0.981，P＜0.05)；而APR3与NFκB/p65表达和APR3与NFAT3表达均无相关性(P＞0.05)。结论：1.APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白在卵巢癌组织中的表达均显著高于卵巢良性肿瘤。提示APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白的表达可能与卵巢癌的发生有关。APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白与卵巢癌的组织分化程度、临床分期及腹腔脏器和淋巴结转移显著相关，提示APR3、NFκB/p65、NFAT3蛋白的过表达可能参与了卵巢癌的发生、发展和浸润转移。2.顺铂对卵巢癌SKOV3、3AO细胞的增殖均有明显的抑制作用，顺铂可能通过抑制APR3、NFκB/p65和NFAT3蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的增殖。3.在卵巢癌组织中，APR3与NFκB/p65蛋白的表达具有正相关性，而在人卵巢癌SKOV3细胞中，APR3与NFκB/p65蛋白的表达、APR3与NFAT3蛋白的表达和NFκB/p65与NFAT3蛋白的表达均均有正相关性；在人卵巢癌3AO细胞中，只有APR3与NFAT3蛋白的表达有正相关性。提示NFκB/p65与NFAT3蛋白可能通过增强APR3的表达促进卵巢癌的发生、发展。
【作者】符秋娟；
【导师】刘钧；
【作者基本信息】川北医学院，病理学与病理生理学，2014，硕士
【关键词】卵巢癌；APR3；NFκB/p65；NFAT3；免疫组化；westernblot；

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