FTY720对EAE小鼠脑组织MMP-9表达影响

【摘要】目的：观察FTY720(fingolimod,芬戈莫德)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneeneephalomyelitis,EAE)小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）的mRNA及蛋白表达的影响,并比较不同剂量FTY720的干预对MMP-9表达影响差异。方法：按照随机的原则将120只雌性C57BL/6小鼠分为6组，每组20只。正常对照组；CFA组；EAE组；10mg/kgFTY720干预EAE组；3mg/kgFTY720干预EAE组；1mg/kgFTY720干预EAE组。构建EAE小鼠模型，免疫第14天，给予不同剂量FTY720干预，相应的正常对照组、CFA组、EAE组给予生理盐水。于FTY720干预后第30天处死所有小鼠。免疫组化技术对脑组织中的MMP-9蛋白表达进行检测。实时荧光定量PCR技术检测MMP-9的mRNA表达。结果：1.各组小鼠的临床表现观察:⑴正常组、CFA组无小鼠发病。⑵与EAE组比较,1mg/kg干预组能减轻临床症状、减少体重下降、延长潜伏期(p<0.05),对发病率无影响(P>0.05);10mg/kg干预组、3mg/kg干预组能减轻临床症状、减少体重下降、延长潜伏期、降低发病率(p<0.05)。⑶与1mg/kg干预组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组能减轻临床症状、减少体重下降、延长潜伏期，差异有统计学意义(p<0.05)。2.各组小鼠脑组织的病理结果观察:⑴HE染色显示正常组、CFA组小鼠侧脑室周围白质无炎性病灶。⑵与EAE组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组、1mg/kg干预组炎性病灶数减少，差异有统计学意义(p<0.05)。⑶与1mg/kg干预组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组炎性病灶数减少(p<0.05)。⑷LFB染色显示正常组、CFA组小鼠侧脑室周围白质无髓鞘脱失,EAE组有较多典型脱髓鞘病灶,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组、1mg/kg干预组中仅少数脱髓鞘病灶。3.各组小鼠脑白质免疫组化观察结果:⑴与正常组、CFA组比较,EAE组MMP-9蛋白的表达水平明显升高，差异有统计学意义(p<0.05)。⑵与EAE组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组、1mg/kg干预组MMP-9蛋白的表达水平降低，差异有统计学意义(p<0.05)。⑶与1mg/kg干预组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组MMP-9蛋白的表达水平降低，差异有统计学意义(p<0.05)。4.各组小鼠脑组织MMP-9的PCR定量检测：⑴与正常组、CFA组比较,EAE组MMP-9的mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义(p<0.05)。⑵与EAE组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组、1mg/kg干预组MMP-9的mRNA表达水平降低，差异有统计学意义(p<0.05)。⑶与1mg/kg干预组比较,10mg/kg干预组、3mg/kg干预组MMP-9的mRNA表达水平降低，差异有统计学意义(p<0.05)。5.FTY720干预剂量与神经功能评分呈负相关(r=-0.779,p=0.000)，与MMP-9蛋白表达呈负相关(r=-0.759,p=0.000)，与MMP-9mRNA表达呈负相关(r=-0.801,p=0.000)，均具有统计学意义。结论：1.FTY720对EAE小鼠治疗作用可能在一定程度上呈剂量相关性。2.FTY720对EAE小鼠的作用机制之一可能是通过下调脑组织中MMP-9的mRNA及蛋白表达水平,进而保护血脑屏障，从而减轻EAE小鼠脑组织的炎性反应。
【作者】谭书伟；
【导师】余巨明；
【作者基本信息】川北医学院，神经病学，2014，硕士
【关键词】实验性自身免疫性脑脊髓炎；多发性硬化；MMP-9；FTY720；

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