腺病毒介导的色素上皮衍生因子抑制人食管癌细胞和脐静脉内皮细胞的体外实验研究

【摘要】目的：色素上皮衍生因子具有抗肿瘤生长和抗血管生成等多种生物潜能。我们通过体外实验，研究PEDF对人食管癌细胞及脐静脉内皮细胞的生物活性，希望探索食管癌基因治疗新方法，为促进PEDF的转化医学研究提供理论依据。方法：将腺病毒介导的色素上皮衍生因子(Ad-PEDF)体外转染人胚肾293T细胞扩增，收集细胞裂解液，用TCID50法测定细胞裂解液病毒滴度。将扩增的重组腺病毒转染293T细胞、人食管癌109细胞和脐静脉内皮细胞，通过半定量PCR和Western-Blot鉴定PEDF基因表达情况。用Transwell实验模型研究PEDF抑制人食管癌109细胞增殖、迁移，及脐静脉内皮细胞迁移。通过人脐静脉内皮细胞诱导毛细血管样管腔形成实验观察PEDF对内皮细胞的抑制活性。通过CCK8细胞增殖活性检测评估PEDF对人食管癌细胞、脐静脉内皮细胞增殖活性的影响。通过流式细胞仪分析PEDF诱导食管癌细胞发生凋亡的活性。结果：重组腺病毒Ad-PEDF在293T细胞内大量稳定扩增，Ad-PEDF的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，能观察到分子量约1.25kb的目的条带；Westernblot结果显示PEDF蛋白在转染了重组腺病毒的人食管癌109细胞、脐静脉内皮细胞中稳定表达。Transwell结果表明：与阴性对照组(携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒Ad-GFP)相比，Ad-PEDF组能明显抑制食管癌细胞的侵袭、迁移及脐静脉内皮细胞的迁徙，结果有明显统计学意义（P＜0.01）。脐静脉内皮细胞诱导的体外新生血管形成实验表明：Ad-PEDF组抑制血管管腔形成的数目明显高于Ad-GFP组，抑制作用随着滴度增加而增强，结果有统计学意义（P＜0.05）。CCK8细胞增殖活性检测显示：与Ad-GFP组相比，Ad-PEDF组能明显抑制食管癌109细胞、脐静脉内皮细胞的增殖，且抑制脐静脉内皮细胞增殖的作用更强，结果具有统计学意义（P＜0.01）。流式细胞仪凋亡检测结果分析：不同滴度的重组病毒转染食管癌109细胞后，病毒滴度为1.5×106PFU/ml时，Ad-PEDF组和Ad-GFP组诱导ECa109凋亡率无差别；病毒滴度高于1.5×106PFU/ml，随着滴度增加Ad-PEDF组诱导ECa109凋亡率高于Ad-GFP组，结果有统计学意义（P＜0.01）；而阴性组不同滴度Ad-GFP诱导ECa109凋亡率无统计学差异。结论：该实验数据初步证明PEDF能抑制食管癌细胞增殖、侵袭及迁移，并诱导食管癌细胞发生一定凋亡。同时，PEDF能明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及体外血管管腔形成。基于以上结果，推测PEDF抗食管癌生物活性可能是通过抑制内皮细胞增殖、迁移而实现。PEDF强大的抗血管生成和抑瘤活性使它成为肿瘤治疗潜力分子，但应用于临床治疗其有效性、安全性(包括合适的载体途径)都需更多研究进一步证实。
【作者】刘露；
【导师】李光明；
【作者基本信息】川北医学院，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】食管癌；色素上皮衍生因子；侵袭；迁移；增殖；抗血管生成；凋亡；

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