油茶内生拮抗细菌Y13定殖动态及对叶内微生物调整效应研究

【摘要】油茶炭疽病(Camelliaoleiferaanthracnose)是我国油茶产区的主要病害之一,严重影响油茶质量和产量。本课题组从健康油茶叶片内分离筛选得到一株对油茶炭疽病具有较好防治效果的内生拮抗细菌Y13,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。菌株Y13对油茶炭疽病病原菌有较强的拮抗作用,盆栽苗木病害防治实验效果好,,为了更好开发菌株Y13为生防菌剂,本论文研究Y13在油茶植株体内的定殖动态及其对油茶叶内微生物的调整效应,主要研究结果如下：(1)内生拮抗细菌Y13在油茶植株体内定殖动态研究。采用抗利福平诱导法,筛选出抗利福平浓度为300μg/mL的标记菌株Y13R,然后采用灌根法、喷雾法、注射法和刺伤叶片法四种接种方法对油茶苗接种菌株Y13R,并于接种后不同时间段对油茶组织内Y13R菌株的定殖量进行检测,结果表明：标记菌株Y13R能通过自然孔口或伤口侵入油茶根茎叶内,并在油茶体内繁殖和传导。不同浓度的Y13R菌液均能在油茶体内定殖,但随着Y13R菌液浓度的增加,定殖时间逐渐延长,回收Y13R菌株数量也相应增加,Y13R菌液的最佳接种浓度为109cfu/mL,最佳接种方法为刺伤法。刺伤法接种Y13R菌液在油茶植株体内的定殖趋势为“先增后减最后趋于稳定”,接种20d后,Y13R菌株定殖量趋于稳定,最终定殖量为3.59×103cfu/g。(2)油茶健株与病株体内主要微生物区系差异的研究。油茶健株与病株体内微生物区系主要由细菌和真菌两大类群组成,没有分离到放线菌。可培养内生细菌主要属于5个属的7个已知种,内生真菌主要属于9个属的7个已知种。油茶健株与病株不同组织内生菌的群落组成及优势菌类群有所不同。病株各组织内细菌的种类均多于健株,枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillussphaericus)和蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)为油茶健株与病株体内所共有的优势细菌；炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonasspp.)和克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)为病株特有的优势细菌。健株体内真菌的种类多于病株,尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、拟茎点霉属(Phomopsisspp.)、芒果球座菌(Guignardiamangiferae)和胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)为健株和病株所共有的优势真菌。油茶健株与病株叶片内细菌数量均显著高于真菌(P<0.05)。病株叶内细菌的数量是健株的1.12～26.63倍。健株叶片内真菌数量是病株的1.33～2.40倍。对油茶健株与病株叶内微生物群落的多样性和均匀性进行分析,结果表明健株叶内微生物群落多样性和均匀性程度均高于病株。(3)内生拮抗细菌Y13对油茶叶内微生物区系的调整效应。实验表明,菌株Y13R能够在油茶健株与病株叶内稳定定殖,定殖能力较强。接种Y13R菌株后,健株叶内细菌数量较对照组提高32.81%-902.59%,而真菌数量则较对照组减少4.36%～39.30%；接种3d和20d时,病株叶内细菌数量较对照组分别提高162.85%和138.98%,之后均低于对照组,而病株叶内真菌数量则显著高于对照组,较对照组提高44.41%-109.42%。不同处理油茶叶内优势类群数量差异很大。接种Y13R菌株后,在健株与病株叶内,枯草芽孢杆菌的数量均较对照组提高87.71%～5358.54%；胶孢炭疽菌数量均较对照组减少18.45%～79.48%。油茶健株和病株的病情指数差异显著(P<0.05),菌株Y13R对健株的预防效果为70.85%,对病株的治疗效果为64.84%。
【作者】王瑞芹；
【导师】周国英；
【作者基本信息】中南林业科技大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】油茶；炭疽病；内生拮抗细菌；定殖；微生物防治；微生态；

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