烟色烟管菌诱变提高漆酶产量的研究

【摘要】漆酶的作用底物广泛,能应用于纺织、食品、造纸、医药、农业等领域,具有广阔的应用前景。真菌是目前认为最有效的漆酶生产者,其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。但是野生菌漆酶活力较低,难以实现漆酶的工业化生产。本实验通过紫外、60Co-γ射线对烟色烟管菌(Bjerkanderafumosa5.172)进行复合诱变,旨在选育高产漆酶的菌株,为工业化生产提供一定理论依据。对烟色烟管菌进行紫外诱变得到最佳诱变时间为180s,正突变率为33.3%。筛选得到稳定遗传的菌株ZW-7,漆酶活力为320.2U/L,较原始菌株提高了27.8%,最高产酶时间较原始菌株提前了2天,为9天。选取ZW-7作为优势菌株进行60Co-γ射线诱变得到最佳辐射剂量为500Gy,正突变率为41.7%。筛选得到稳定遗传的菌株Co-11,漆酶活力为380.5U/L,比诱变株ZW-7提高了18.9%,比原始菌株提高了51.8%,最高产酶时间与原始菌株一样为11天。以诱变菌株Co-11为研究对象,通过单因素实验和响应面实验优化得到最适培养基为(1L)：葡萄糖15g,麦麸10g,尿素0.17g,Cul2+的添加浓度为0.75mmol/L,藜芦醇的添加浓度为2.25mmol/L,KH2PO42g,MgSO4·7H2O1.5g,维生素B110-20mg,吐温801g,微量元素70mL。响应面实验表明碳氮比、Cu2+浓度、藜芦醇浓度对漆酶活力均有显著影响,其中藜芦醇浓度的影响最显著。通过单因素实验和正交实验优化发酵外部条件得到温度为28℃、接种量为5个直径约为5mm的菌块、pH为5.5、装液量为100mL和转速为120r/min时,漆酶活力达到最大。正交实验表明各因素对漆酶活力的影响大小依次为装液量、pH、温度和接种量。在此基础上发酵得到的漆酶活力为828.1U/L,与优化前相比,漆酶活力提高了117.6%。在优化的发酵培养基和最适的培养条件下对Co-11进行逐级扩大培养,在500mL、1L摇瓶发酵中,产漆酶活力的趋势和大小与250mL摇瓶体系基本保持一致。
【作者】彭滟钞；
【导师】曹福祥；
【作者基本信息】中南林业科技大学，发酵工程，2014，硕士
【关键词】烟色烟管菌；紫外线；60Co-γ射线；复合诱变；漆酶；

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