油茶果皮多酚的分离纯化及其生物活性研究

【摘要】油茶(CamelliaoleiferaAbel.)是中国特有的植物油料树种,种植面积大、分布范围广。油茶的果实由油茶果皮(又称油茶蒲)和油茶籽构成,分别约占总质量的60%和40%。从油茶籽压榨提炼所得的植物油即为茶油,色清味香、营养价值高且具有广泛的生物活性,已在医药、化妆品、食品保健以及化工等领域得到广泛的应用,是优质植物油。油茶果皮,虽在工业上常用于栲胶、糠醛、木糖醇、活性炭、碳酸钾和焦性磷酸钾等化工产品的生产,但对其综合开发利用仍比较薄弱。目前,国内对油茶果皮的生物活性已有了初步研究,但对其多酚的研究却比较少。本文将研究油茶果皮多酚的分离纯化及其对细胞活性的影响。主要内容与结果如下：(1)SephadexLH-20纯化油茶果皮多酚及其体外抗氧化活性研究在利用D101大孔树脂纯化油茶果皮粗提物的基础上,再利用SephadexLH-20对其进一步分离纯化,所得多酚的纯度为79.04±4.62%。同时,本文研究发现油茶果皮多酚能较强的清除DPPH(IC50=15.03μg/mL)、ABTS自由基(IC50=92.48μg/mL)、超氧离子02-(IC50=0.48mg/mL).羟自由基OH(IC50=0.66mg/mL)、抗脂质过氧化(IC50=0.46mg/mL)等的能力。实验表明：油茶果皮多酚对活性氧成分具有较强的清除功能,且随着浓度的增加清除效果随之增强。(2)油茶果皮多酚对AAPH引起的质粒DNA氧化损伤的保护作用利用琼脂糖凝胶电泳技术(AGE),将油茶果皮多酚与其他五种多酚单体对AAPH引起的质粒DNA氧化损伤的保护效果进行了比较。结果表明：油茶果皮多酚对DNA具有显著的保护用,且由强到弱的次序为ECG>槲皮素>没食子酸>油茶果皮多酚>EGC>EGCG。(3)油茶果皮多酚粗提物对DNA氧化损伤的影响利用D101大孔树脂纯化油茶果皮提取物,所得油茶果皮多酚粗提物的纯度为34.5%；采用单细胞凝胶技术(SCGE)确定了H202对HUVEC细胞的最佳损伤终浓度为50μmol/L,此时细胞拖尾率为97.33%、彗星尾长58.73±±5.1μm；油茶果皮多酚粗提物在50-500mg/L浓度范围内,能显著的降低H202诱导的DNA损伤程度,与阳性对照组比较,有显著性的差异(P<0.01或P<0.05),说明油茶果皮多酚粗提物对H202诱导的DNA损伤具有一定的保护作用。经AGE分析,APPH可以引起质粒DNA的断裂,并确定了最佳损伤浓度为10mmol/L;油茶果皮多酚粗提物对APPH介导的DNA链断裂有显著的保护作用,说明油茶果皮多酚粗提物能有效的清除羟自由基,从而起到保护DNA的作用。(4)油茶果皮多酚对细胞氧化损伤的保护利用四甲基偶氮哇盐比色法(MTT),单细胞凝胶电泳(SCGE),p53基因扩增,流式细胞检测等技术,研究油茶果皮多酚对细胞氧化损伤的影响；并对细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及乳酸脱氢酶(LDH)的含量进行了测定分析。结果表明：油茶果皮多酚能有效的提高细胞活性,降低DNA的氧化损伤、p53基因的表达以及抑制细胞的凋亡。
【作者】侍银宝；
【导师】钟海雁；
【作者基本信息】中南林业科技大学，森林食品加工与利用，2014，硕士
【关键词】油茶果皮多酚；SephadexLH-20；油茶果皮多酚粗提取物；细胞凋亡；人气静脉内皮细胞；氧化损伤；

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