转TiERF1基因油菜的获得及分子检测

【摘要】油菜是我国重要的油料作物。近年来,由核盘菌所引起的油菜菌核病已成为严重影响油菜生产。推广和选育抗菌核病油菜品种是控制该病害最安全、经济和有效的措施。然而,目前缺乏有效的抗菌核病油菜品种,基因工程技术为油菜抗抗菌核病育种提供了一条新途径。本研究利用已有的单子叶植物表达载体pA20-TiERF1,构建双子叶植物表达载体pBI121-TiERF1,在建立油菜再生体系及遗传转化体系的基础上,采用农杆菌介导法,将TiERF1基因转入甘蓝型油菜湘油15号和中双9号中,获得了转基因油菜植株。主要结果如下：1.pBI121-TiERF1植物表达载体的构建根据TiERFl基因序列,使用primer5软件设计引物,并加入BamHI和SacI酶切位点,采用PCR扩增TiERF1基因,并将其连接到pEASY-T1载体上进行测序。测序结果表明：扩增片段与原有TiERF1序列完全一致,没有发生错配。将pEASY-T1-TiERF1载体和pB1121载体分别用BamHI和SacI双酶切,将得到的TiERF1片段与pBIl21载体片段连接,构建表达载体pBI121-TiERF1。通过冻融法将其转化农杆菌LBA4404,并进行菌落PCR检测。2.中双9号再生体系的建立在所筛选的生长素浓度配比中,中双9号最佳预培养基为MS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/L2.4-D,最佳分化培养基为MS+3.Omg/L6-BA+0.02mg/LNAA+4.5mg/LAgNO3,再生率为92.5%。3.中双9号和湘油15号遗传体系的优化通过单因素对农杆菌转化效果的研究表明：湘油15号对TiERF1基因最优转化条件为：选取5d苗龄的幼苗,预培养3d、菌液OD600为0.6,侵染5mmin,共培养2d,加入AS200nmoI/L;中双9号对TiERFl基因最优转化条件为：选取5d苗龄的幼苗,预培养3d、菌液OD600值0.4,侵染5min,共培养2d,加入AS200μmol/L。4.中双9号和湘油15号再生植株的获得及分子检测在经过Kan严格筛选后获得湘油15号抗性植株8株,中双9号抗性植株9株。对再生植株进行PCR检测得到湘油15号阳性植株4株,中双9号阳性植株5株,分别占再生植株的50.00%和55.56%。本研究获得了转TiERF1基因油菜。
【作者】刘茜；
【导师】王爱云；
【作者基本信息】中南林业科技大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】甘蓝型油菜；TiERF1基因；农杆菌介导法；PCR；

【参考文献】
[1]李小青.南方稀土尾砂坡地土壤水分及植被恢复空间差异性研究[D].南京信息工程大学,自然地理学,2012,硕士.
[2]王素霞.花椒酰胺电子舌响应规律及其应用研究[D].西南交通大学,微生物与生化药学,2014,硕士.
[3]李平.基于TOR橡胶沥青路面的材料性能试验研究及力学响应分析[D].扬州大学,结构工程,2011,硕士.
[4]朱玉全,孙志挥,宋余庆,陈耿.一种基于FP-tree的最大频繁项目集挖掘算法[A].中国计算机学会数据库专业委员会.第十九届全国数据库学术会议论文集（研究报告篇）[C].中国计算机学会数据库专业委员会:,2002:3.
[5]陈荣.利用应答器信息的在线学习停车算法[D].北京交通大学,智能交通工程,2013,硕士.
[6]许诺.FoxM1在非小细胞肺癌转移和靶向治疗耐药中的作用及机制研究[D].复旦大学,内科学,2012,博士.
[7]朱国成.基于团队的企业绩效管理体系研究[D].华北电力大学（北京）,技术经济及管理,2004,硕士.
[8]王琼.一种向前兼容的面向资源和服务的解析机制研究[D].北京交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[9]顾洋.教师专业共同体建设研究[D].广西师范大学,教育学原理,2013,硕士.
[10]郑璐璐.我国影子银行监管制度研究[D].宁波大学,法律,2014,硕士.
[11]沈磊.高效液相色谱—串联质谱测定食品中工业色素的研究[D].河北科技大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[12]方华.螺旋CT增强扫描与Dyna-CT对原发性肝癌小病灶的诊断价值比较[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[13]刘俊宏.基于Tilera多核处理器的远程教学服务器视频编码软件研发[D].浙江大学,电子信息技术及仪器,2013,硕士.
[14]于婷婷.RHIC能区重离子碰撞中初态几何对椭圆流的影响[D].哈尔滨工业大学,粒子物理与原子核物理,2014,硕士.
[15]王恒.中华鲟子二代环境偏好性研究[D].华中农业大学,湿地资源与环境,2014,硕士.
[16]于珊珊.混合陶瓷滚珠丝杠副的刚度对机床定位精度的影响[D].燕山大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[17]陈春燕.PEG修饰对脂质纳米载体胃肠道转运的影响[D].浙江大学,药剂学,2013,硕士.
[18]袁爽.纳米复合材料修饰电极的电化学/光电化学传感器的制备及在典型污染物检测中的应用[D].华中师范大学,2013.
[19]曾令明,唐常杰,阴小雄,蒋永光,刘娟,廖勇.基于位图矩阵和双支持度的中药配伍挖掘技术[J].四川大学学报(自然科学版),2005,01:57-62.
[20]潘成刚.模型元方法与金属塑性成形模拟[D].武汉理工大学,材料加工工程,2003,硕士.
[21]王雅琳,陈斌,王晓丽,桂卫华.基于密度调整的改进自适应谱聚类算法[J].控制与决策,2014,09:1683-1687.
[22]高美娟,田景文.基于径向高斯网络的薄互储层参数预测[J].石油地球物理勘探,2001,05:540-545+654.
[23]汤璘.车载网络及其在汽车后视镜驱动中的应用研究[D].西南交通大学,机械电子工程,2013,硕士.
[24]张浩,和敬涵,尹航,薄志谦,TonyYip.电网孤岛重构的云计算策略[J].中国电机工程学报,2011,34:77-84+9.
[25]曹艳艳.从《赫索格》、《洪堡的礼物》和《更多的人死于心碎》中看贝娄对性别身份的建构[D].安徽大学,英语语言文学,2013,硕士.
[26]李春伟,那广利,张熹.师生诉求视角下高校基层服务型党组织建设研究[J].品牌(下半月),2015,02:210.
[27]路崎,赵强,张红明,李季,王献红,王佛松.空心微球聚苯胺二次锂氧电池正极材料研究[J].高分子学报,2013,08:1080-1084.
[28]宗方.综合功能属性和非功能属性的Web服务组合研究[D].西南大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[29]王闯.中国民营银行发展与经济增长：1985～2012年[D].辽宁大学,西方经济学,2014,博士.
[30]梁红娟.家族企业盈余质量研究[D].湖北大学,会计学,2011,硕士.
[31]鲁启鹏.基于金属氧化物TiO_2和Y_2O_3纳米材料光电性能的研究[D].北京交通大学,2014.
[32]张淏.TD-LTE无线传播模型参数校正研究[D].广东工业大学,精密仪器及机械,2013,硕士.
[33]沈贺.对外汉语教材中生词的英文译释对留学生习得汉语的影响[D].上海外国语大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[34]郑协.旋挖钻机桅杆疲劳试验机设计与研究[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士.
[35]杨刚,朱国仁,何舒.滚子链链长精度八点测量法[J].农业机械学报.2007(08)
[36]H.M.索黑尔,M.S.阿比德,A.M.安萨里,闫崇彬.发展中国家天然气价格的制定——对巴基斯坦实例研究[J].国际石油经济.1994(04)
[37]鲍艳.基于零电压零电流转移原理的三相PWM软开关逆变器的研究[D].东北大学,电力电子与电力传动,2010,硕士.
[38]李辰.交通方式划分的LOGIT模型方法[D].河海大学,交通运输规划与管理,2004,硕士.
[39]周光辉,鲍立威.面向供应链的智能物流管理系统设计[J].工业控制计算机,2004,04:7-8.
[40]马苓.高等学校管理流程分析与改进研究[D].河北工业大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[41]程花.南京郊县农村生活垃圾分类收集及资源化的初步研究[D].南京农业大学,固体废物处理工程,2013,硕士.
[42]郭聪修.从结构主义到后结构主义[D].广西师范大学,文艺学,2013,硕士.
[43]滕爱凤.基于素质模型的饭店员工招聘实证研究[D].渤海大学,旅游管理,2013,硕士.
[44]李海军.岭澳核电站蒸汽发生器的运行特性分析[D].华南理工大学,动力工程,2012,硕士.
[45]中房报记者李克纯　李栋.“故事大王”华丽家族开讲新故事[N].中国房地产报,2015-05-25B03.
[46]郑德印.陕西省银行业发展与经济增长关系的理论和实证分析[D].西安科技大学,产业经济学,2014,硕士.
[47]林鉴.重复阅读是否影响读者的眼动模式？[D].福建师范大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[48]刘文旭.集中供热系统量化管理优化控制应用研究[D].北京建筑大学,供热、供燃气、通风及空调工程（专业学位）,2013,硕士.
[49]胡琛,唐晓波.数据仓库技术在配电线路电量管理系统中的应用[J].电力需求侧管理,2004,02:22-25.
[50]王瑞娟.HIF-1α、MVD在中晚期宫颈鳞癌中的表达及介入化疗对二者的影响[D].辽宁医学院,妇产科学,2012,硕士.