蓖麻毒蛋白的提取分离技术研究

【摘要】蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素,其在医药、农业及军事领域有着重要作用,已成为当前抗癌药物研究的热点。传统使用缓冲液浸泡分离蓖麻蛋白的工艺提取时间较长,导致部分蛋白失活,且收率低。另外,工业使用压榨法分离蓖麻油,蛋白易高温变性。针对提取分离过程中存在的问题,本文以蓖麻籽为原料,探讨脱脂工艺,并采用超声波为辅助手段提取蓖麻蛋白。在提高蛋白提取率的同时,通过减短提取时间来提高毒蛋白活性,并使用琼脂糖凝胶-4B亲和层析进一步纯化蓖麻毒蛋白。蓖麻籽脱脂使用浸出法对蓖麻籽脱脂,对四种有机溶剂(石油醚、乙醚、丙酮、乙醚-酒精)脱脂效果进行比较,结果表明丙酮的脱脂效果最好。蓖麻蛋白提取工艺条件优化在蓖麻蛋白超声波辅助提取工艺中通过Box-Behnkens试验及响应面分析方法对提取工艺条件进行优化,得到超声波辅助提取的最佳工艺条件：超声波时间22min,料液比67mL/g,pH7.4,超声波功率160W。在此条件下蓖麻蛋白提取率可达84.06%。蓖麻毒蛋白分离纯化在使用琼脂糖凝胶-4B对蓖麻蛋白进行纯化过程中采用正交试验L9(34)设计对纯化工艺条件进行优化,得到最佳纯化条件：缓冲液pH7.2,缓冲液浓度0.15mol/L,D-半乳糖浓度0.15mol/L,洗脱速度1.0mL/min,在此条件下,毒蛋白得率可达11.85%,蓖麻毒蛋白纯度为95.10%(HPLC)。以上研究结果表明,超声辅助提取及亲和层析有利于蓖麻毒蛋白的提取,提取率较高,快速省时,保护蓖麻毒蛋白的生理活性,是切实可行的提取分离工艺,经小鼠毒性试验表明活性良好,可以应用于蓖麻毒蛋白的提取利用中。
【作者】李楠；
【导师】黎继烈；
【作者基本信息】中南林业科技大学，发酵工程，2014，硕士
【关键词】蓖麻毒蛋白；提取；分离；超声波；亲和层析；响应面；

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