青鳉Pod1基因的克隆及表达

【摘要】动物的性别决定是自然界最令人注目的现象之一,也是生命科学中的一个重要的研究领域。Podl基因作为bHLH转录因子家族B组转录因子,参与哺乳类的调控神经元发生、肌细胞生成、哺乳类的肌肉形成、性腺发育、性别决定和性别分化等。然而,至今为止,在非哺乳类脊椎动物中,有关Podl基因在性别分化和性腺发育过程功能方面的研究国内外尚未见其它报道。我们利用模式动物青鳉作为研究对象,获得的主要结果如下：1.根据已知小鼠的Podl基因序列预测青鳉Podl基因的序列并设计特异性引物,通过PCR技术克隆了Podl基因的开放阅读框,它包含516个碱基,编码171个氨基酸。然后应用3’race技术克隆了Podl基因的3端序列,其长度大约为200bp。2.利用生物信息学软件分析了结构的相似性,构建了进化树。同线性分析显示,青鳉的Podl基因定位在24号染色体上,在人类中Podl基因在6号染色体上。3.提取了青鳉的各个组织的总RNA,通过逆转录合成cDNA第一条链,然后进行PCR扩增,然后通过琼脂糖凝胶电泳分析检测Podl基因在成体青鳉不同组织中的表达分布情况,结果表明Podl基因除了在性腺中表达外,还在心脏、肾脏、肝脏等组织中表达。4.将Podl基因连接到PQE-his-tag原核表达载体中,然后将其转化到大肠杆菌BL21中表达Podl基因的蛋白,经SDS-PAGE胶进行分析蛋白大小,证明蛋白表达正确。总之,本文利用青鳉为模式动物克隆了Pod1基因的ORF序列及3’端序列,分析了Pod1基因的组织表达谱,并构建了原核表达载体,为进一步研究Pod1基因在鱼类胚胎发育和性别分化中的功能及其作用的分子机理奠定了基础。
【作者】王艳杰；
【导师】李建中；
【作者基本信息】湖南师范大学，动物学，2014，硕士
【关键词】Pod1基因；青鳉；克隆；表达分析；

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