KSHV编码vGPCR对斑马鱼胚胎早期发育的影响

【摘要】卡波氏肉瘤(KS)是艾滋病患者常见的高致死性血管增生型肿瘤。卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是KS的直接病因,该病毒基因组编码的G-蛋白偶联受体(vGPCR)是已知的几个KSHV致瘤蛋白之一,此蛋白与KSHV相关恶性肿瘤的发生密切相关。vGPCR在细胞中的表达能够激活多条信号通路和影响诸多转录因子从而增加促炎症细胞因子和血管生成细胞因子的生成。vGPCR在裸鼠中表达能够引起裸鼠产生肿瘤,转vGPCR基因小鼠也能形成类似人类KS的病变。斑马鱼是一种重要的模式生物,在胚胎发育机制的研究及各种人类疾病研究中得到了广泛的应用。斑马鱼作为人类病毒研究的模式生物罕见报道,目前尚未有采用斑马鱼来研究KHSV的研究报道。本研究首次采用斑马鱼来对KHSV中致癌基因vGPCR进行研究,鉴定vGPCR对斑马鱼早期胚胎发育的影响。本研究采用显微注射法将vGPCR基因导入斑马鱼受精卵；利用形态学观察、mRNA水平表达检测、血管生成定量分析和血管染色法分析vGPCR对斑马鱼早期胚胎发育的影响。本论文研究内容和研究结果如下：1.以FRT/TO-cDNA5载体和CDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体为基础构建了表达vGPCR的重组质粒CDH-CMV-HA-vGPCR-EF1-copGFP;2.通过磷酸钙转染法将CDH-CMV-HA-vGPCR-EF1-copGFP转入HEK293T细胞,并进行免疫印迹杂交检测,结果显示该重组质粒能够在细胞内成功表达目的蛋白；3.采用显微注射技术将CDH-CMV-HA-vGPCR-EF1-copGFP导入斑马鱼受精卵,统计结果表明注射vGPCR的实验组胚胎存活率为50.80%,GFP表达率为53.58%；注射空载体的对照组胚胎存活率为55.02%,GFP表达率为48.16%。形态学检测结果显示,注射vGPCR的胚胎与对照组的发育进程基本一致,vGPCR对斑马鱼胚胎早期形态发育未产生明显影响；对注射了vGPCR并表达GFP的胚胎进行RT-PCR检测,结果显示vGPCR在斑马鱼胚胎中存在较低水平的mRNA表达；4.利用碱性磷酸酶定量检测法对vGPCR注射组斑马鱼胚胎和对照组胚胎分别进行分析,结果表明两组胚胎的碱性磷酸酶含量相差不大,表明vGPCR对斑马鱼早期胚胎血管生成总量无明显影响；5.对注射vGPCR后72小时的胚胎血管进行碱性磷酸酶染色,观察到斑马鱼胚胎新生血管发育受到了不同程度的影响,主要为肠下静脉扭曲与血管排布紊乱,说明vGPCR能够造成斑马鱼胚胎早期血管发育畸形。综上所述,本研究证明了vGPCR基因能够在斑马鱼胚胎中表达,外源vGPCR的导入对斑马鱼早期胚胎的形态学发育并未造成明显影响,但会导致斑马鱼早期胚胎新生血管发育畸形。本研究表明斑马鱼能够成为研究vGPCR及KSHV的生物模型,为今后研究vGPCR以及其他KSHV基因的致病机制开拓了新的领域。
【作者】肖俊；
【导师】冯浩；
【作者基本信息】湖南师范大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】vGPCR；斑马鱼；血管生成；

【参考文献】
[1]申孟哲.摇荡声情而檠括于兴观群怨[D].北京大学,文艺学,2013,硕士.
[2]周元忠.TC10钛合金热稳定性能研究[D].长安大学,机械工程,2013,硕士.
[3]倪晔.基于J2EE的银行CRM系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[4]田冲.基于IP网络的QoS队列调度算法研究[D].南京邮电大学,电路与系统,2013,硕士.
[5]吴晓龙.纳米碳纤维/碳纤维复合体增强炭/炭复合材料的制备工艺研究[D].华东理工大学,化学工艺,2014,硕士.
[6]左燕梅.厚重的现实和精神的超越[D].华中科技大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[7]崔小岳.粘着控制中数据处理方法研究与实现[D].西南交通大学,控制工程,2014,硕士.
[8]常瑞霞.“逸”与“适”的双向改写[D].吉林大学,中国古代文学,2014,硕士.
[9]钱方琦.小型双螺杆压缩机关键技术研究及CFD仿真分析[D].浙江工业大学,2010.
[10]丁文心.基于XMPP协议的即时通讯系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2011,硕士.
[11]徐倩.诺和锐联合阿卡波糖治疗2型糖尿病的临床分析[J].医学理论与实践,2014,19:2567-2568.
[12]康海燕.河北省行唐县小麦白粉病发生动态与防控技术研究[D].中国农业科学院,植物保护（专业学位）,2012,硕士.
[13]骆菲菲.《银色森林的芭特》翻译实践报告[D].河北师范大学,翻译,2013,硕士.
[14]唐媛媛.渭北岩溶地区水体硬度的去除技术研究[D].长安大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[15]任瑛琦.长春市老年人长跑爱好者脚着地方法调查与研究[D].吉林大学,体育,2014,硕士.
[16]程珊珊.网络信息资源检索的利器——一种新型搜索引擎技术[J].视听界(广播电视技术),2005,03:62-65.
[17]莫海萍.任务型教学法在初中英语语法教学的应用[D].广西师范大学,学科教学,2013,硕士.
[18]孙大光.基于C8051F040车载X射线机架模块化的设计[D].华东理工大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[19]王娇瑜.NDXY制药公司的营销策略研究[D].厦门大学,工商管理（EMBA）,2014,硕士.
[20]李林.建筑隔震支座力学模型对隔震分析结果的影响性研究[D].华中科技大学,结构工程,2013,硕士.
[21]熊五沅.ABS汽车制动性能模拟计算与评价研究[D].华东交通大学,车辆工程,2013,硕士.
[22]于秋莹.中美生产性服务贸易竞争力比较分析[D].辽宁大学,国际贸易学,2012,硕士.
[23]张志彬.兰州地区高校校园建筑能耗分析及节能措施初探[D].西安建筑科技大学,建筑技术科学,2013,硕士.
[24]陈有德.废旧钢纤维橡胶再生混凝土短柱受力性能研究[D].广东工业大学,结构工程,2013,硕士.
[25]陈诚.南京信息职业技术学院教务管理系统设计及实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[26]赵月霞.铁路建设与城市环境[J].铁道经济研究.2005(04)
[27]逯振宇.新时期中国知识分子在马克思主义中国化进程中的作用研究[D].河北经贸大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[28]吕海玲.科技异化的根源及其消解路径研究[D].吉林大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[29]梁明.Web Service系统集成研究[D].华东师范大学,计算机应用,2004,硕士.
[30]丁聪.实验大小鼠螺杆菌流行病学调查及肝螺杆菌flaB基因的表达[D].扬州大学,动物学,2011,硕士.
[31]黄晓霞,萧蕴诗.一种新型的基于多智能体的KDD系统结构[J].同济大学学报(自然科学版),2002,07:853-857.
[32]黄毅.螯合树脂修饰的SBA-15对水溶液中Au(Ⅲ)的吸附性能研究[D].湖南师范大学,工业催化,2013,硕士.
[33]杜泗洲.锥形球形空心零件的新拉延法[J].航空工艺技术.1991(02)
[34]王银潞.高新技术产业与传统产业上市公司股票价值评估比较研究[D].浙江理工大学,企业管理,2012,硕士.
[35]杨刚,张斌.类石墨烯二维原子晶体的微态理论模型[J].力学学报,2015,03:.
[36]朱浩霖.广东清远电子垃圾污染区多环芳烃含量、组成及其在土壤—植物系统中的分配[D].南京农业大学,植物学,2013,硕士.
[37]李立群.典型非局部弹性元件的静力学和动力学分析[D].国防科学技术大学,力学,2012,硕士.
[38]胡琴.“金砖国家”利用外商直接投资宏观绩效比较分析[D].浙江工业大学,2012.
[39]朱晓萍.江西地区传统民居中女性空间的设计及其文化表达[D].广东工业大学,环境艺术设计及其理论,2013,硕士.
[40]刘德现.基于Java3D与VRML的虚拟枪械训练系统设计[D].华中科技大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[41]刘丽婷.高选择性高灵敏度糖肽富集及质谱检测新技术与新方法[D].复旦大学,分析化学,2013,博士.
[42]吴美庆.《独一无二的伊万》翻译报告[D].内蒙古大学,翻译,2014,硕士.
[43]张引.江西省高职院校发展管理对策研究[D].南昌大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[44]唐千.Pretender la Legibilidad entre la Fidelidad y la Traición de la Traducción Literaria[D].西安外国语大学,西班牙语语言文学,2014,硕士.
[45]杨勇辉.石墨烯的制备、表征及机理研究[D].西南科技大学,2011.
[46]康一梅,吴沧浦.多目标动态规划时段轮换并行算法[J].自动化学报,1994,05:561-568.
[47]李雪莲.无线传感器网络定位系统设计与实现[D].太原科技大学,系统工程,2013,硕士.
[48]石薪靖,王玉勃,徐志峰.EAM在吉林建龙设备管理中的应用[J].冶金自动化,2013,03:23-28.
[49]罗焱.基于WBEM的仪器测试系统的研究与实现[D].华东师范大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[50]王经.渐变掺杂技术在有机发光二极管中的应用[D].上海交通大学,2014.