多倍体鱼IKKε基因功能的初步研究

【摘要】天然免疫又被称之为非特异性免疫,指个体与生具有的、作用范围广、不针对特定抗原的免疫能力。天然免疫是一种包含大量模式识别受体(PRR)的高度复杂的快速诱导免疫反应,这些模式识别受体识别各种病原体相关分子模式(PathogenAssociatedMolecularPatterns,PAMPs),并通过各个不同的信号通路激活机体的免疫应答。IKKε(inhibitorofNF-kBkinaseε)是天然免疫系统中Toll-Like信号通路以及NF-kB(nuclearfactor-kappaB)信号通路中的一种激酶,它是最新发现的IκB激酶家族(IkBkinase,IKKs)的成员,最初被认定为脂多糖诱导的丝氨酸/苏氨酸激酶。IKKε在信号分子的作用下磷酸化IkBα来诱导激活NF-kB,或者与TBK1(TANK-bindingkinase1)在支架蛋白的作用下磷酸化IRF3(interferonregulatoryfactor3)与IRF7(interferonregulatoryfactor7)激酶,从而诱导IFN的分泌。天然免疫是鱼类等低等脊椎动物的防御病害侵袭的基础,存在于哺乳动物中的天然免疫信号通路的许多基因组分在硬骨鱼中也是保守的。目前,鱼类TLR\RIG-I,以及MAVS基因都已经成为当今鱼类天然免疫的研究热点,然而有关鱼类IKKε在天然免疫中的功能研究却罕见报道。在本论文中,我们克隆了鲤科重要经济养殖鱼类——草鱼、青鱼的IKKε基因cDNA全长序列,以及二倍体/三倍体/四倍体特殊性鱼类的IKKs基因部分cDNA基因序列,并初步研究了青鱼IKKε基因的功能。本论文的研究内容及结果如下：1.青鱼IKKε基因cDNA全长2537bp,其中5’非编码区长度为285bp,开放阅读框的长度为2169bp,3’非编码区的长度为83bp,预测可编码723个氨基酸,蛋白分子量为82556。草鱼IKKε基因的cDNA全长2529,其中5’非编码区长度为274bp,开放阅读框的长度为2169bp,3’非编码区的长度为86bp,预测可编码723个氨基酸,蛋白分子量为82476.9。2.比较青鱼与草鱼的IKKs基因的同源性得知：青鱼草鱼的IKKε基因同源性非常高,达到了97.3%；与斑马鱼IKKε基因的序列同源性为73.4%；与哺乳动物和鸟类的IKKε基因同源性较低。通过进化树分析也可以发现,青鱼与草鱼的IKKε基因出现在同一个分支,符合它们同源性很高的比对结果。对青鱼与草鱼的IKKε的氨基酸序列分析发现,两者的蛋白质序列都具有IκB激酶家族相似的蛋白结构域。3.以pcDNA5-FRT/TO载体和CDH-CMV-Linker载体为基础构建了表达青鱼的IKKε基因的重组质粒,pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC·ikk与pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG以及CDH-CMV-Puro-FLAG-BC-ikk与CDH-CMV-Puro-BC-ikk-FLAG载体。通过磷酸钙转染法将该重组质粒转染到HEK293T细胞中,Westenblot检测到青鱼的IKKε基因能够在HEK293T细胞中正常表达,并证实了其蛋白分子量大约为85KD左右。4.使用Lipofectamine2000将FRT/TO-Flag-bcIKKε及FRT/TO-bcIKKε-Flag重组质粒分别转染到小鼠成纤维细胞NIH3T3以及鲤科鱼类成纤维细胞EPC细胞中,通过免疫荧光和激光共聚焦扫描分析结果表明青鱼IKKε基因主要在细胞质中表达。5.克隆了二/三倍体IKKε基因部分编码区,以及四倍体IKKε基因部分cDNA序列。其中四倍体IKKε基因3’非编码区长度为85bp。综上所述,本实验克隆了草鱼、青鱼的IKKε基因cDNA全长序列,并克隆了二／三／四倍体IKKε基因cDNA的部分序列。并对青鱼IKKε基因的表达和细胞内定位做了初步研究。本论文对将来系统研究IKKe基因在青鱼、草鱼以及多倍体鱼天然免疫中的功能打下了基础。
【作者】周曼；
【导师】冯浩；
【作者基本信息】湖南师范大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】IKKε；青鱼；草鱼；多倍体鱼；

【参考文献】
[1]白惠文.Web2.0环境下企业隐性知识转化研究[D].郑州大学,情报学,2013,硕士.
[2]汪栋.农村民俗活动动员机制研究[D].华中师范大学,社会学,2013,硕士.
[3]靳会敏.1例易栓症患者家系蛋白C基因单核苷酸多态性分析[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[4]戴思.人民警察职业道德建设的路径探究[D].吉林大学,思想政治教育,2012,硕士.
[5]李明廓.葵花籽油制备生物柴油工艺的研究[D].吉林农业大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[6]袁军锋.捷联惯导系统振动控制技术研究[D].中北大学,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[7]刘超.传统零售商应对纯网上零售商竞争时的零售渠道策略[D].中国科学技术大学,管理科学,2014,硕士.
[8]牛志广.近岸海域水环境容量的研究[D].天津大学,2004.
[9]程建军.煤的流化床部分气化及硫迁徙特性研究[D].华中科技大学,热能工程,2013,硕士.
[10]王飞飞.离子束能量测试技术研究[D].西安工业大学,光学工程,2014,硕士.
[11]杨丽君.吡哆胺对高糖“代谢记忆”致糖尿病视网膜病变的治疗作用[D].福建医科大学,眼科学,2014,硕士.
[12]黄子荣,刘应亮,黄浪欢,马艳芳.钛配合物/氧化石墨烯复合储氢材料的制备及其性能研究[J].广东化工,2015,08:40-41+39.
[13]高延红,伍亚玲,周巧萍,张俊芝.氯离子环境下混凝土钢筋坑蚀深度的随机性研究[J].自然灾害学报,2014,01:221-228.
[14]李岩.高三信息技术教学中学案导学策略的应用研究[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[15]范文婷.基于.NET的小区物业管理系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[16]张颖.2000-2010年西安市地表水水环境质量分析[D].西北农林科技大学,环境科学,2011,硕士.
[17]魏群.小鼠毛囊周期中表皮朗格汉斯细胞及树突状表皮T细胞的变化[D].中国医科大学,皮肤病与性病学,2004,硕士.
[18]吕飞虎.双馈异步风力发电机矢量控制系统的研究[D].西安科技大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[19]張明瑛.《上海博物館藏戰國楚竹書》的異構字研究[D].华中科技大学,漢語言文字學,2012,硕士.
[20]阙荣辉.硅碳纳米材料在纳米发电机中的应用研究[D].苏州大学,2012.
[21]梁瑜虹.我国报纸营销策略分析[D].暨南大学,2002.
[22]赵亮.根土复合体抗剪强度试验研究[D].中南林业科技大学,结构工程,2014,硕士.
[23]薄翠梅,王执铨,张广明,张登峰.一类多指标约束下模糊非线性系统的满意容错控制[J].控制与决策,2010,07:998-1003+1009.
[24]贾丽男.国有商业银行中间业务发展的策略研究[D].吉林大学,高级管理人员工商管理,2012,硕士.
[25]赵廷伟.底部大空间框支密肋复合墙结构抗震性能试验研究[D].西安建筑科技大学,结构工程,2004,硕士.
[26]李公国.论法与习俗的协同[D].湖南师范大学,法学理论,2003,硕士.
[27]高云锋.科学/经验学习对我国装备制造企业技术能力跃迁的影响研究[D].浙江理工大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[28]陆志强,张思源,崔维伟.集成预防性维护和流水线调度的鲁棒性优化研究[J].自动化学报,2015,05:906-913.
[29]姜涛.历史题材影视资源在中学历史教学中的应用[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[30]刘新芳.女性主义视角下女硕士毕业主观就业障碍和介入策略研究[D].山东大学,社会工作（专业学位）,2013,硕士.
[31]陆树洋.层层自组装肝素/胶原复合涂层接枝CD133抗体促进小口径ePTFE人工血管内皮化的实验研究[D].复旦大学,外科学,2013,博士.
[32]胡杰武,韩丽.宏观经济因素与跨国并购股东财富效应[J].北京交通大学学报(社会科学版),2015,01:60-69.
[33]叶明,李经彩,周振,郑天娇,谷晨霞.海外并购中目标企业价值评估风险防范研究[J].会计之友,2015,09:54-56.
[34]薛东齐.中国番茄黄化曲叶病毒株系分化及侵染性克隆的构建[D].东北农业大学,蔬菜学,2013,硕士.
[35]张丽丹.中国电视民生新闻理论、实践及反思[D].华中师范大学,新闻学,2013,硕士.
[36]刘影.非法经营罪案研究[D].黑龙江大学,法律,2012,硕士.
[37]安颖.网柄细胞状黏菌中脂肪酸的测定及其分类学意义的初步研究[D].吉林农业大学,菌类作物,2012,硕士.
[38]张伟博,郭艳平.平衡冲击压路机工作特性浅析[J].轻工科技,2014,10:50-51.
[39]高艳.基于太阳能油罐远程监测系统[D].大连理工大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[40]李志磊.人脑胶质瘤中ALDH1表达及其与Ki-67和MGMT的关系研究[D].兰州大学,外科学,2014,硕士.
[41]卢强.基于Map/Reduce的移动学习用户群聚类分析[D].华中师范大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[42]王英华.《玛丽·巴顿》节选汉译及翻译报告[D].西北大学,英语笔译（专业学位）,2014,硕士.
[43]牛苏燕.蝴蝶兰ACC合成酶（ACS）反义基因植物表达载体的构建及遗传转化[D].河南农业大学,植物学,2012,硕士.
[44]杨娟.丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对房颤大鼠心房肌细胞模型钾通道Kv1.5基因表达影响的研究[D].贵阳中医学院,中西医结合临床,2012,硕士.
[45]林海.辽河油田恒泰利集团公司发展战略研究[D].大连理工大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[46]李景平.HnRNPL在唯支持细胞综合征中的功能及机制研究[D].南方医科大学,外科学,2012,硕士.
[47]南岚.中国进口贸易技术溢出效应研究[D].湖北大学,世界经济,2011,硕士.
[48]马超.基于区域和主动轮廓的花卉图像分割与处理系统研究与开发[D].南京农业大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[49]同非.基于计算智能的单多基地外辐射源雷达定位新方法研究[D].西安电子科技大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[50]周小聪.基于Petri网的自适应工作流模型的研究与应用[D].湖南大学,软件工程,2011,硕士.