大鼠肝再生过程中质膜微区比较蛋白质组研究
【摘要】肝脏是具有极强再生能力的器官,研究并阐明再生的机制可为肝移植与肝损伤相关的疾病治疗提供理论依据。质膜含有被命名为“脂筏(lipidrafts)”和“质膜微囊(Caveolae)”的微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导、运输胆固醇等重要功能。该再生过程中,质膜微区脂筏蛋白质受到内部调控的影响会发生改变,捕获脂筏微区信号蛋白质分布的变化对于理解和阐明肝再生过程中信号通路途径等有着重要意义。本研究应用成熟的大鼠2/3肝切除模型结合蔗糖密度梯度离心法,提取假手术组(再生0h)与肝再生组(再生48h)大鼠肝脏细胞质膜,并进一步纯化获得质膜微区蛋白质。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离以及ESI-Q-TOF质谱鉴定,对获得的微区蛋白质进行差异分析,结果显示,有40个微区蛋白质差异表达,其中17个蛋白质表达量上调,23个蛋白质表达量下调。生物信息学分析表明,所鉴定到的蛋白质主要参与细胞增殖、程序性死亡、细胞凋亡等调控,同时涉及到了与肝再生密切相关的血管生成等信号通路。脂筏标记蛋白1(Flotillin-1)是一个已知的脂筏微区特异性蛋白质,可作为生物标志物对复杂样本进行验证。本文通过选择Flotillin-1蛋白中两段特异性氨基酸序列合成标准肽段,并对其进行18O标记,验证质膜微区蛋白质肝再生48h组相应蛋白。该方法利用合成的标准肽段序列明确的特点,结合MRM技术(质谱多反应监测技术)对质谱结果进行分析。二级质谱图解析后的结果表明合成肽段序列能正常碎裂和鉴定。经18O标记后的合成肽段与复杂样本(质膜微区蛋白质48h组)混合,得到相差4Da质谱峰,从而可以验证复杂样本中的Flotillin-1蛋白。本研究为微区蛋白质的研究提供了方法上的参考以及相关基础数据,基于质谱技术对目标蛋白的验证为蛋白质验证方法提供了新思路,并为后续建立蛋白质绝对定量模型提供线索。
【作者】蔡乃旋；
【导师】陈平；
【作者基本信息】湖南师范大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】肝再生；质膜微区；LC-MS/MS质谱；MRM；蛋白质组；
【参考文献】
[1]袁春明,刘文耀,李小双,杨国平.哀牢山湿性常绿阔叶林木质藤本植物地上部分生物量及其对人为干扰的响应[J].植物生态学报,2009,05:852-859.
[2]沈乃澂.计量学的世纪变迁质量单位千克与物质的量摩尔定义的历史、现状和发展趋势(一)[J].中国计量,2011,05:60-62.
[3]李媛媛.T集团公司内部控制评价研究[D].北京交通大学,2014.
[4]刘鹤仪.装修板材用量与板材有害物含量对室内甲醛浓度影响研究[D].青岛理工大学,供热、供燃气、通风与空调工程,2012,硕士.
[5]徐溪.基于无线传感网的通用桥式起重机能耗感知系统研究[D].中国矿业大学,电力电子与电力传动,2014,硕士.
[6]吴乐奇.大型褐煤干燥设备在线监测与控制系统的研究[D].东北大学,机械设计及理论,2010,硕士.
[7]黄慧敏.基于深度图像的无缝纹理映射[D].北京建筑大学,地图制图学与地理信息工程,2013,硕士.
[8]李小亮.时序扩展的UML状态图的测试用例生成研究[D].西南大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[9]王雪松.体操普修教学课程运动损伤致因及预防的研究[D].内蒙古师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[10]黄正敏.HE4、HP及CA125联合检测在卵巢上皮性癌中的临床诊断价值[D].遵义医学院,妇产科学,2014,硕士.
[11]徐建农.乡镇企业抽样调查信息系统研究[D].安徽农业大学,2003.
[12]王聪娜.外源性机械生长因子E肽对雌性大鼠尿道损伤修复过程中内源性机械生长因子表达的影响[D].山西医科大学,妇产科学,2013,硕士.
[13]冯海美.基于KBE的注塑模具概念设计系统研究[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[14]李群善.寒冷地区高速公路边坡生态防护与服务区节能环保技术[D].长安大学,道路与铁道工程,2014,硕士.
[15]刘晓东,徐翊华,于吉红,李乙,曾伟,陈超,李激扬,庞文琴,徐如人,XUYing.数据挖掘辅助定向合成──(Ⅰ)具有特定孔道结构的微孔磷酸铝[J].高等学校化学学报,2003,06:949-952.
[16]周晶晶.葡萄糖氧化酶对百香果浑浊果汁储藏过程中褐变的抑制研究[D].广西科技大学,生物化工,2013,硕士.
[17]伍晨愉.断纹检测及其在指纹识别中的应用研究[D].清华大学,模式识别和智能系统,2003,硕士.
[18]颜昌盛.从搜狐的成功看互联网品牌塑造[D].华中师范大学,2004.
[19]杨从辉.基于FTIR的红外光纤损耗谱特性测试系统研究[D].复旦大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[20]王漪,于继来,柳焯.基于月度竞价空间滚动均衡化的年中标电量分解[J].电力系统自动化,2006,17:24-27+64.
[21]张旭.我国企业财务文化研究[D].山西财经大学,会计学,2014,硕士.
[22]张银环.早全新世季风演化的多指标高分辨率石笋记录研究[D].西南大学,第四纪地质学,2014,硕士.
[23]刘卫兵a,杨艺b,韩德强a.一种基于FCOWA-ER的SVM多分类方法[J].控制与决策.
[24]谢凤英.价值澄清理论对我国高校思想政治教育的启示[D].黑龙江大学,思想政治教育,2013,硕士.
[25]李芝涵.老年公寓康复性景观设计研究[D].长安大学,建筑设计及其理论,2013,硕士.
[26]王阳元.加强科技创新是发展我国集成电路产业的关键[J].中国集成电路,2013,03:18-23.
[27]闫民.流域生态补偿机制的构建和相关法律制度研究[D].四川省社会科学院,法律（专业学位）,2014,硕士.
[28]裴正林,余钦范.小波多尺度井间地震波形层析成像方法[J].石油地球物理勘探,2001,06:104-103+102-101+100-99+98-97+96-95+0.
[29]霍建文.寿险企业客户服务质量测量方法研究[D].大连海事大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[30]任鹤.基于dsRNA的烟草和番茄抗双生病毒基因工程研究[D].浙江大学,植物病理学,2012,硕士.
[31]何志锋.腺相关病毒增强型小鼠白介素10质粒的构建及表达[D].浙江大学,外科学,2004,硕士.
[32]李萍.受托人责任比较研究[D].郑州大学,民商法学,2013,硕士.
[33]那娜.农业产业化经营组织的发展研究[D].哈尔滨理工大学,技术经济及管理,2012,硕士.
[34]刘桂君.华晨金杯汽车质量追溯管理信息系统开发方案研究[D].吉林大学,工业工程,2014,硕士.
[35]靳艳.米渣酱油酿造工艺及品质研究[D].湖北工业大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[36]付仁明.北京市卫生财经人员现状调查研究[D].北京中医药大学,社会医学与卫生事业管理,2013,硕士.
[37]郝晓飞.抗慢性阻塞性肺病药物阿地溴铵的合成方法研究[D].河北医科大学,药物化学,2014,硕士.
[38]郎保才.MIMO系统联合天线选择算法研究[D].重庆大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[39]张笑.天然气管网稳动态仿真及其负荷预测系统的研究[D].西安理工大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[40]杜峥嵘.乌拉特婚礼仪式音乐的调查与研究[D].内蒙古大学,音乐学,2014,硕士.
[41]郑勇峰.察打一体化无人机总体方案设计[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[42]油清波.甘蓝型油菜次生休眠特性的遗传多样性与外源基因的种间转移[D].中南民族大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[43]刘国强.县级职教中心“校企合作”的困境与对策研究[D].东北师范大学,课程与教学论,2012,硕士.
[44]孙辉.粮食加工企业的产品成本控制策略[J].企业改革与管理,2014,05:74-75.
[45]芦克龙.基于CFD的汽车制动盘散热性数值计算与优化[D].湖南大学,车辆工程,2011,硕士.
[46]李靖.氧化石墨的制备与氢敏特性研究[D].中北大学,2012.
[47]李树青.基于G3-PLC的电力线通信接收机的设计与实现[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[48]秦强.耕地集约化程度研究[D].南京农业大学,农村与区域发展,2013,硕士.
[49]李锦丽.带表面电极的压电弹性梁的静力学解析解[D].北京交通大学,结构工程,2012,硕士.
[50]宋开文.公共服务均等化视域下农村社区教育问题研究[D].中国矿业大学,行政管理,2014,硕士.
