CFL相互作用蛋白的鉴定及其在斑马鱼心脏发育中的初步功能研究

【摘要】心脏是人体的重要器官,心脏发育相关基因正常发挥其功能是心脏发育的关键。探究心脏发育相关基因的功能,能够为了解先天性心脏病的发病机制和干预性治疗提供基础。斑马鱼CFL基因是从斑马鱼胚胎的cDNA文库中克隆出来的一个心脏发育候选基因,可能在斑马鱼心脏发育过程中起重要作用。为研究该基因的功能,本文对CFL基因进行了生物信息学分析、制备了CFL蛋白的多克隆抗体、研究了斑马鱼胚胎发育过程中CFL基因的表达情况、RA信号对CFL表达的影响以及CFL与DVL2的相互作用。生物信息学分析表明：CFL基因编码278个氨基酸,含有一个ZF-CXXC结构域。通过RT-PCR获得了CFLcDNA,表达、纯化了CFL蛋白并且制备了针对CFL的特异性多克隆抗体。胚胎原位杂交表明,CFLmRNA在斑马鱼发育各个时期均有表达。Western-blot结果表明,CFL在斑马鱼胚胎发育的过程中在胚胎期至36hpf期间表达呈现上升趋势,并且在24hpf时表达最强,36hpf后表达有所下调。在成年斑马鱼的心脏、肌肉、卵、眼睛、脊索、鳍和鳃部位均有表达。胚胎抗体染色结果显示,在斑马鱼胚胎发育24hpf时,CFL蛋白的表达范围较广,并且在脊索中表达量较高,在心脏中CFL主要在心室区域表达。本研究室前期研究结果显示CFL基因受到RA信号的调控。为进一步研究CFL对斑马鱼心脏发育的调控机制,本文利用RA的抑制剂DEAB处理了斑马鱼之后,在24hpf时期进行了胚胎原位杂交实验,分析了DEAB对CFL表达的影响。结果显示DEAB促进CFL表达的上调。运用免疫共沉淀技术分析RA处理的胚胎中CFL蛋白的表达情况,结果显示CFL表达有所上调。因此,RA促进CFL蛋白的表达。CO-IP实验结果显示,CFL蛋白与WNT通路重要成员DVL2蛋白之间存在相互作用,提示CFL可能是RA信号与Wnt通路之间的联系分子。综上所述,CFL可能通过与DVL2的相互作用而联系RA信号与Wnt通路,进而在斑马鱼心脏发育过程中起到重要的作用。
【作者】王盼盼；
【导师】万永奇；吴秀山；
【作者基本信息】湖南师范大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】心脏发育；斑马鱼；western-blot；相互作用；

【参考文献】
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