虫草多糖脱色脱蛋白工艺研究及抗NCI-H446肿瘤细胞活性检测

【摘要】目的：对虫草粗多糖脱色,脱蛋白工艺进行考察；通过分离纯化得虫草精多糖CCSP-1组分,并通过GC-MS分析该部分单糖组成以及摩尔比。考察CCSP-1对非小细胞肺癌NCI-H446细胞体外抑制作用以及促进细胞凋亡作用的影响,初步探究其作用机制,为虫草多糖进一步研究提供实验数据和理论依据。方法：1、虫草多糖的提取以及其脱色脱蛋白工艺研究：采用水浴回流提取,经乙醇醇沉得虫草粗多糖,通过单因素和正交试验并以脱色率与多糖损失率为指标确定其最佳脱色条件；以脱蛋白率与多糖损失率为指标,对sevag法,TCA法及HCl法三种脱蛋白方法进行比较选择较好的脱蛋白方法。2、虫草精多糖的单糖组成研究：通过水提醇沉再经DEAE-52纤维素柱层析以及SephadexG-100凝胶柱过水层析纯化,得单一纯多糖CCSP-1;采用TFA酸解以及乙酸酐衍生对其进行GC-MS分析,确定其单糖的组成及其摩尔比。3、CCSP-1抗NCI-H446肿瘤细胞作用初步研究：采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法探讨虫草多糖对体外NCI-H446肿瘤细胞的增殖抑制作用；用碘化丙啶PI单染试验对实验药物作用后的细胞进行细胞周期检测。用AnnexinV-FITC/PI两种染料对活细胞,早期凋亡细胞及晚期凋亡细胞／坏死细胞进行定量检测,研究虫草多糖对NCI-H446肿瘤细胞的凋亡作用。结果：1、人工虫草多糖活性炭脱色的最佳条件是：活性炭加入量为1.5%,温度50℃,时间为10min,pH值为3.5。对sevag法,TCA法及HC1法三种脱蛋白方法进行比较,sevag法为三种方法中较好的脱蛋白方法。2、GC-MS对虫草多糖CCSP-1组分进行分析得出：CCSP-1由三种单糖组成,其摩尔比为Man:Glu:Gal=1.7:4.4:1。3、虫草多糖CCSP-1抗肿瘤活性检测结果：MTT实验显示CCSP-1可抑制NCI-H446细胞的生长,并呈剂量依赖关系,其IC50值为347μg/ml;PI单染试验结果说明CCSP-1通过将NCI-H446细胞阻滞于G2/M期而实现对抑制其增殖作用；而AnnexinV-FITC/PI双染结果显示CCSP-1对NCI-H446细胞的凋亡影响甚微。
【作者】郭思维；
【导师】邱细敏；
【作者基本信息】湖南师范大学，药物分析，2014，硕士
【关键词】人工虫草多糖；脱色；脱蛋白；GC-MS分析；NCI-H446细胞；抗肿瘤活性；

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