CcpA在单核细胞增生李斯特菌中的功能初探

【摘要】单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)是一种重要的革兰氏阳性人畜共患食源性致病菌。分解代谢物控制蛋白CcpA(catabolitecontrolproteinA)是一种具有多效性功能的调控蛋白。在革兰氏阳性菌中,CcpA不仅参与碳分解代谢物阻遏(carboncataboliterepression,CCR)效应,还参与生物被膜形成和毒力基因表达等多种生理过程。Lm中也存在CcpA的编码基因ccpA,但其多效功能未有文献阐明,因此,本研究通过构建CcpA缺失菌株,比较Lm野生株EGDe和CcpA缺失株EGDeAccpA在菌落形态、鞭毛运动、碳源利用和生物被膜形成等的差异,初步探索CcpA在Lm中的多效功能。实验结果如下：1.CcpA在Lm菌落形态、鞭毛运动和生长代谢中具有重要作用。缺失ccpA基因后：细菌在固体BHI平板上菌落直径增大,边缘变的不规则；细菌丧失了运动能力,显微镜下观察不到鞭毛存在；缺失株不能在添加了葡萄糖的基础培养基MEM中生长,但在LB培养基中的生长速度加快,生物量增加。2.CcpA在Lm生物被膜形成中具有重要作用。EGDe△ccpA几乎不能形成生物被膜,而在相同培养条件下野生株EGDe可以形成交联网状的生物被膜。3.CcpA在LmCCR效应中具有重要作用。野生株EGDe在LB培养基中的生长受到抑制,细菌生长浓度OD600最高只能达到0.6,添加速效碳源葡萄糖可显著增加细菌的生物量；而EGDeAccpA在LB中生长快速,最大生物量与在BHI培养基中相同,添加葡萄糖不影响细菌的生长。表明CcpA的缺失解除了细菌对非速效碳源利用的抑制(也就是所谓的CCR效应)促进了细菌在LB中的生物量。综上所述,CcpA在Lm中不仅参与CCR的调控,而且在细菌菌落形态、鞭毛形成和生物被膜形成中具有重要的作用。今后我们将进一步研究CcpA与Lm毒力基因表达的关系,深入解析CcpA的功能。
【作者】瞿慧萍；
【导师】罗勤；
【作者基本信息】华中师范大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】单核细胞增生李斯特菌；CcpA蛋白；碳分解代谢物阻遏；生物被膜；菌落形态；鞭毛运动；

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