Sirt1通过血红素氧化酶-1调控脓毒症内皮细胞自噬对凋亡的影响

Sirt1通过血红素氧化酶-1调控脓毒症内皮细胞自噬对凋亡的影响

作者:师大云端图书馆 时间:2015-06-29 分类:期刊论文 喜欢:4085
师大云端图书馆

【摘要】第一部分脂多糖干预对血管内皮细胞凋亡和自噬的影响目的:1、选择合适的脂多糖浓度和干预时间复制脓毒症内皮细胞模型。2、明确脂多糖干预对内皮细胞凋亡和自噬的影响。3、明确自噬对脓毒症内皮细胞凋亡的影响。方法:第一步:体外培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),给予不同浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml)和不同时间(Oh、12h、24h、48h)脂多糖干预。用MTT法测定各组HUVEC相对存活率。用ELISA法测定各组IUVEC培养液上清中TNF-α、IL-6、血管内皮生长因子、脂联素表达水平。用流式细胞仪检测各组HUVEC凋亡率。用免疫荧光法检测各组HUVEC自噬强度。根据细胞存活率、炎症因子表达、凋亡率选择合适的脂多糖浓度和干预时间复制脓毒症细胞模型。第二步:在合适浓度和时间LPS干预HUVEC复制脓毒症内皮细胞模型基础上,将HUVEC分为3组,分别为:对照组(0μg/mlLPS组)、LPS组和3-MA+LPS组(3-MA为自噬抑制剂)。用MTT法测定LPS干预后各组HUVEC相对存活率。用小管形成实验检测各组HUVEC小管合围长度和面积。用流式细胞仪检测各组HUVEC凋亡率。用免疫荧光法检测各组HUVEC自噬强度。用定量RT-PCR测定凋亡相关基因(caspase-3)和自噬相关基因(beclin-1.LC3B)mRNA相对表达量。用western-blot检测凋亡相关蛋白(Caspase-3)和自噬相关蛋白(Beclin-1.LC3B)相对表达量。各组计量资料以(Mean±SD)表示,采用SPSS18.0软件进行One-WayANOVA检验比较呈正态分布的多个独立样本均数,用Kruskal-WallisH进行非正态分布的多个独立样本均数比较检验,用LSD-t检验进行正态分布的多样本间均数的多重比较。P<0.05认为组间差异有统计学意义。结果:1、LPS干预HUVEC后存活率呈浓度和时间依赖模式下降.设对照组(Oμg/mlLPS干预)HUVEC存活率为1,LPS(5μg/ml)组:0.93±0.03,LPS(10μg/ml)组:0.84±0.03,LPS(50pg/ml)组:0.65±0.02。各不同浓度LPS干预组两两比较差异有统计学意义;比较10μg/mlLPS干预培养HUVEC细胞不同时间点存活率,设Oh组存活率为1,12h组:0.88±0.02,24h组:0.81±0.04,48h组:0.69±0.02。各时间点LPS干预组两两比较差异有统计学意义。2、LPS不同浓度和不同时间点干预HUVEC细胞培养液上清TNF-α、IL-6和血管内皮生长因子浓度与对照组(分别为0μg、mlLPS组和0h组)比较上升;LPS干预组HUVEC细胞培养液上清脂联素浓度与对照组(分别为Opg/mlLPS组和Oh组)比较下降。3、LPS干预HUVEC细胞凋亡率(%)呈浓度和时间依赖模式增加。各浓度LPS组凋亡率分别为:对照组:3.68±0.14,LPS(5μg/ml)组:5.93±0.18,LPS(10μg/ml)组:11.57±0.23,LPS(50μg/ml)组:15.15±0.46。各浓度组间两两比较差异有统计学意义;以10μg/mlLPS干预培养HUVEC细胞,各时间点凋亡率分别为:Oh组:2.58±0.12,12h组:9.12±0.55,24h组:11.70±0.83,48h组:14.69±0.65。各时间点组间两两比较差异有统计学意义。4、LPS干预HUVEC细胞自噬强度随浓度递增呈低、中浓度上升、高浓度下降模式变化。各LPS浓度组自噬强度分别为:对照组:60.78±2.00,LPS(5μg/m1)组:85.70±6.56,LPS(10μg/ml)组:133.96±4.8,LPS(50μg/ml)组:115.19±8.46。各浓度组间两两比较差异有统计学意义;LPS干预HUVEC细胞自噬强度随时间递增呈先上升后下降趋势。各时间点组自噬强度分别为:Oh组:60.78±2.00,12h组:111.71±6.48,24h组:133.96±4.81,48h组:96.49±6.74。各时间点组间两两比较差异有统计学意义。5、在合适浓度和时间LPS干预HUVEC复制脓毒症内皮细胞模型基础上。以自噬抑制剂3-MA干预LPS刺激的HUVEC,观察自噬抑制剂对脓毒症内皮细胞存活率、小管形成能力、凋亡率和自噬强度的影响。细胞存活率:设对照组存活率为1,LPS组:0.84±0.03,3-MA+LPS组:0.68±0.03。三组间两两比较差异有统计学意义;各组内皮小管合围长度(μm)分别为:对照组:47.06±2.66,LPS组:22.03±2.55,3-MA+LPS组;13.57±1.84。三组间两两比较差异有统计学意义;各组内皮小管合围面积(μm2)分别为:对照组:113.03±5.47,LPS组:44.87±3.81,3-MA+LPS组:25.60±2.83。三组间两两比较差异有统计学意义;各组细胞凋亡率(%)分别为:对照组:3.68±0.14,LPS组:11.57±0.23,3-MA+LPS组:14.19±0.60。三组间两两比较差异有统计学意义;各组自噬强度分别为:对照组;60.78±2.00,LPS组:133.96±4.81,3-MA+LPS组:80.43±4.39。三组间两两比较差异有统计学意义;各组凋亡相关基因caspase-3mRNA相对表达量分别为:对照组:1.52±0.10,LPS组:6.05±0.92,3-MA+LPS组:8.01±1.17,三组间两两比较差异有统计学意义;各组Caspase-3蛋白相对表达量分别为:对照组:0.29±0.05,LPS组:0.90±0.02,3-MA+LPS组:1.10±0.02,三组间两两比较差异有统计学意义;各组beclin-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.38±1.02,LPS组:9.00±1.54,3-MA+LPS组:6.05±0.44,三组间两两比较差异有统计学意义;各组Beclin-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.34±0.80,LPS组:1.38±0.57,3-MA+LPS组:1.05±0.90,三组间两两比较差异有统计学意义;各组LC3BmRNA相对表达量分别为:对照组:2.05±0.24,LPS组:7.00±0.90,3-MA+LPS组:6.06±0.59,三组间两两比较差异有统计学意义;各组LC3B蛋白相对表达量分别为:对照组:0.90±0.07,LPS组:1.91±0.16,3-MA+LPS组:1.58±0.10,三组间两两比较差异有统计学意义。结论:1、10μg/ml脂多糖干预HUVEC24h可以较好的模拟脓毒症内皮细胞炎症反应和细胞凋亡反应。2、脂多糖干预HUVEC后凋亡和自噬增加,自噬发挥细胞适应性保护作用。3、抑制脓毒症内皮细胞自噬导致细胞凋亡增加。第二部分血红素氧化酶-1对脓毒症内皮细胞凋亡和自噬的影响目的:1、明确不同浓度脂多糖干预对HUVECHO-1表达的影响。2、明确HO-1对脓毒症内皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:第一步:HUVEC分别与终浓度为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml的含LPS的培养液中共孵育24h。以0μg/mlLPS干预HUVEC组为对照组,用定量RT-PCR检测HUVECHO-1mRNA表达,用western-blot检测HO-1蛋白表达。第二步:在合适浓度和时间LPS干预HUVEC复制脓毒症内皮细胞模型基础上,用HO-1激动剂(hemin)、抑制剂(ZnPP)和自噬抑制剂(3-MA)联合HO-1激动剂(hemin)分别预处理LPS干预的]3UVEC24h,以未干预培养的HUVEC为对照组,仅LPS干预的HUVEC为LPS组,HO-1激动剂hemin预处理LPS干预培养的HUVEC为hemin组,HO-1抑制剂ZnPP预处理LPS干预培养的HUVEC为ZnPP组,以3-MA联合hemin预处理LPS干预培养的HUVEC为3-MA+hemin组。用MTT法检测各组细胞存活率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;免疫荧光法检测各组自噬强度;用定量RT-PCR和Western-blot方法分别检测凋亡相关基因(caspase-3)和自噬相关基因(beclin-1和LC3B)mRNA和蛋白表达。各组计量资料以(Mean±SD)表示,采用SPSS18.0软件进行One-WayANOVA检验比较呈正态分布的多个独立样本均数,用Kruskal-WallisH进行非正态分布的多个独立样本均数比较检验,用LSD-t检验进行正态分布的多样本间均数的多重比较。P<0.05认为组间差异有统计学意义。结果:1、定量RT-PCR和western-blot检测不同浓度LPS干预的HUVECHO-1mRNA和蛋白表达。各组HO-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.03±0.03,LPS(5μg/ml)组:1.21±0.07,LPS(10μg/ml)组:2.30±0.13,LPS(50μg/ml)组:2.31±0.12。各组HO-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.27±0.03,LPS(5μg/ml)组:0.46±0.01,LPS(10μg/ml)组:0.66±0.03,LPS(50μg/m1)组:0.68±0.03。比较各组HO-1mRNA和蛋白相对表达量:与对照组比较,LPS(5μg/ml)组、LPS(5μg/ml)组和LPS(50μg/ml)组HO-1mRNA和蛋白相对表达量增加,LPS(50μg/ml)组最高。LPS(10μg/ml)组与LPS(50μg/ml)组比较,HUVEC表达HO-1mRNA和HO-1蛋白相对表达量比较差异无统计学意义。2、MTT法检测各组细胞存活率。设对照组为1,其他各组细胞存活率均值分别为:LPS组:0.84±0.04,hemin组:0.93±0.06,ZnPP组:0.81±0.04,3-MA+hemin组:0.81±0.06。ZnPP组和3-MA+hemin组细胞存活率无显著差异,其他各组间细胞存活率两两比较差异均有统计学意义。3、用流式细胞仪检测各组凋亡率(%),各组细胞总凋亡率分别为:对照组:3.68±0.14,LPS组:13.20±0.54,hemin组:9.20±0.36,ZnPP组:14.70±0.45,3-MA+hemin组:11.20±0.46。各组间细胞凋亡率的两两比较差异均有统计学意义。4、用免疫荧光法检测各组自噬强度,各组自噬强度均值分别为:对照组:76.06±4.14,LPS组:133.96±4.81,hemin组:206.82±2.11,ZnPP组:106.18±7.02,3-MA+hemin组:89.26-3.10。各组间细胞自噬强度两两比较差异均有统计学意义。5、定量RT-PCR和western-blot检测各干预组的HUVECHO-1mRNA和蛋白相对表达量。各组HO-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.03±0.03,LPS组:2.31±0.31,hemin组:4.42±0.36,ZnPP组:1.29±0.11,3-MA+hemin组:4.30±0.20。各组HO-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.41±0.02,LPS组:0.77±0.09,hemin组:1.49士0.07,ZnPP组:0.48±0.05,3-MA+hemin组:1.41±0.05。各组间HO-1mRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义。6、定量RT-PCR和western-blot检测各组HUVECcaspase-3mRNA和蛋白表达,各组caspase-3mRNA相对表达量分别为:对照组:1.52±0.09,LPS组:6.05±0.92,hemin组:3.02±0.46,ZnPP组:8.01±1.17,3-MA+hemin组:5.02±0.93。各组Caspase-3蛋白相对表达量分别为:对照组为:0.29±0.05,LPS组:0.87±0.07,hemin组:0.52±0.06,ZnPP组:1.10±0.02,3-MA+hemin组:0.69±0.05。各组间caspase-3mRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义。7、定量RT-PCR和western-blot检测各组HUVECbeclin-1mRNA和蛋白表达,各组beclin-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.05±0.03,LPS组:6.05±0.44,hemin组:9.00±1.54,ZnPP组:5.05±0.49,3-MA+hemin组:3.00±0.55。各组Beclin-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.344±0.08,LPS组为:1.05±0.09,hemin组:1.38±0.06,ZnPP组:0.82±0.04,3-MA+hemin组:0.62±0.07。各组间beclin-1mRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义。8、定量RT-PCR和western-blot检测各组HUVECLC3BmRNA和蛋白表达,各组LC3BmRNA相对表达量分别为:对照组:2.05±0.24,LPS组L:6.06±0.59,hemin组:7.00±0.90,ZnPP组:4.51±0.61,3-MA+hemin组:3.48±0.39。各组LC3B蛋白相对表达量分别为:对照组:0.85±0.06,LPS组:1.58±0.10,hemin组:1.91±0.16,ZnPP组:1.40±0.06,3-MA+hemin组:1.11±0.06。各组间LC3BmRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义。结论1、在一定浓度范围内,LPS干预可以呈剂量依赖模式促进HO-1表达。2、HO-1参与调控脓毒症内皮细胞凋亡和自噬。3、HO-1通过促进脓毒症内皮细胞自噬抑制凋亡。第三部分sirtl对血红素氧化酶-1调控脓毒症内皮细胞凋亡和自噬的影响目的:1、明确脓毒症内皮细胞中sirt1对血红素氧化酶-1的作用。2、明确sirt1对脓毒症内皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:第一步:通过生物信息网站查找sirt1基因序列,通过生物信息软件构建sirt1-siRNA套餐。细胞分为对照组(HUVEC正常培养组)、siRNA阴性片段组(siRNA阴性片段转染HUVEC组)和各候选sirt1-siRNA组(候选sirt1-siRNA转染HUVEC组)。用定量RT-PCR和western-blot方法测定对照组、siRNA阴性片段组和各候选sirt1-siRNA组IUVEC中的sirt1-mRNA和蛋白相对表达量,选择合适的sirt1-siRNA片段。比较24h和72hsirt1-siRNA转染率(%),选择合适的转染时间点。第二步:在合适浓度和时间LPS干预HUVEC复制脓毒症内皮细胞模型、选择最佳sirt1-siRNA片段和最佳转染时间基础上,实验分为对照组(无干预HUVEC)、LPS组(脓毒症内皮细胞组)、sirtl-阴性片段组(sirt1阴性片段转染脓毒症内皮细胞组)、sirt1-siRNA组(sirt1-siRNA转染脓毒症内皮细胞组)、白藜芦醇(sirt1激动剂)组(白藜芦醇干预脓毒症内皮细胞组)。用MTT法测定各组细胞存活率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;用免疫荧光法检测自噬强度;用定量RT-PCR和western-blot方法检测各组HO-1、凋亡和自噬相关基因mRNA和蛋白相对表达量。各组计量资料以(Mean±SD)表示,采用SPSS18.0软件进行One-WayANOVA检验比较呈正态分布的多个独立样本均数,用Kruskal-WallisH进行非正态分布的多个独立样本均数比较检验,用LSD-t检验进行正态分布的多样本间均数的多重比较。P<0.05认为组间差异有统计学意义。结果:1、经过生物信息学软件选择含sirt1-siRNA-238、siRNA-1185、siRNA-2010和阴性片段组成的sirt1-siRNA套餐.合成阴性片段和各siRNA片段后转染HUVEC24h,定量检测各组HUVECsirt1-mRNA相对表达量分别为:对照组:9.48±0.92,siRNA阴性片段组:9.52±1.14,siRNA-238组:1.03±0.03,siRNA-1185组:2.30±0.53,siRNA-2010组9.48±1.34。定量检测各组SIRT1蛋白相对表达量分别为:对照组:1.18±0.11,siRNA阴性片段组:1.17±0.11,siRNA-238组:0.34±0.04,siRNA.1185组:0.67±0.06,siRNA-2010组:1.08±0.07。比较各组相对表达量,显示siRNA-238组sirt-1mRNA和蛋白相对表达量最低,与实验中其他各组比较差异有统计学意义。24h、72h点sirt1-siRNA-238转染率(%)分别为84.00±1.15,68.30±2.03。72h组与24h组转染率比较显著降低,差异有统计学意义。2、MTT法检测细胞存活率:设对照组细胞存活率为1,LPS干预组:0.84±0.05,siRNA阴性片段组:0.82±0.03,sirt1-siRNA组:0.76±0.05,白藜芦醇组:0.90±0.03。LPS干预组与siRNA阴性片段组细胞存活率无显著性差异,余各组间两两比较差异均有统计学意义;3、流式细胞仪检测各组凋亡率(%)分别为:对照组:3.62±0.08,LPS干预组:12.5±0.33,siRNA阴性片段组:12.68±1.07,sirt1-siRNA组:17.10±0.12,白藜芦醇组:7.12±0.19。LPS干预组与siRNA阴性片段组细胞凋亡率无显著性差异,余各组间两两比较差异均有统计学意义;4、免疫荧光法检测各组自噬强度分别为:对照组:72.06±3.54,LPS干预组:133.96±4.81,siRNA阴性片段组:130.67±15.86,sirt1-siRNA组:105.88±8.29,白藜芦醇组:185.38±10.76。LPS干预组与siRNA阴性片段组细胞自噬强度无显著性差异,余各组间两两比较差异均有统计学意义;5、定量RT-PCR检测各组HUVECHO-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.07±0.06,LPS组:2.31±0.34,siRNA阴性片段组:2.80±0.27,sirt1-siRNA组:1.49±0.09,白藜芦醇组6.57±0.79。Western-blot法测定HO-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.51±0.08,LPS组:0.95±0.07,siRNA阴性片段组:0.94±0.08,sirt1-siRNA组:0.65±0.06,白藜芦醇组:1.31±0.02。LPS干预组与siRNA阴性片段组HO-mRNA和蛋白的相对表达量均无显著性差异,余各组间HO-mRNA和蛋白的相对表达量的两两比较差异均有统计学意义;6、定量RT-PCH检测各组HUVECcaspase-3mRNA相对表达量分别为:对照组:1.52±0.10,LPS组:5.02±0.93,siRNA阴性片段组:5.18±0.78,sirt1-siRNA组:8.01±1.17,白藜芦醇组:3.02±0.46。Western-blot法测定Caspase-3蛋白相对表达量分别为:对照组:0.29±0.05,LPS组:0.62±0.03,siRNA阴性片段组:0.62±0.06,sirt1-siRNA组:0.85±0.06,白藜芦醇组:0.50±0.03。LPS干预组与siRNA阴性片段组caspase-3mRNA和蛋白相对表达量均无显著性差异。余各组间caspase-3mRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义;7、定量RT-PCR检测各组beclin-1mRNA相对表达量分别为:对照组:1.05±0.03,LPS组:5.05±0.49,siRNA阴性片段组:5.52±0.45,sirt1-siRNA组:3.00±0.55,白藜芦醇组9.00±1.54。各组Beclin-1蛋白相对表达量分别为:对照组:0.34±0.08,LPS组:0.98±0.07,siRNA阴性片段组:1.05±0.08,sirt1-siRNA组:0.76±0.06,白藜芦醇组:1.38±0.06。LPS干预组与siRNA阴性片段组beclin-1mRNA和蛋白相对表达量比较均无显著性差异。余各组间beclin-1mRNA和蛋白的相对表达量两两比较差异均有统计学意义;8、各组LC3BmRNA相对表达量分别为:对照组:2.05±0.24,LPS组:4.51±0.61,siRNA阴性片段组:4.47±0.61,sirt1-siRNA组:3.48±0.39,白藜芦醇组:7.00±0.90。各组LC3B蛋白相对表达量分别为:对照组:0.90±0.08,LPS组:1.58±0.10,siRNA阴性片段组:1.55±0.07,sirt1-siRNA组:1.18±0.08,白藜芦醇组:1.91±0.16。LPS干预组与siRNA阴性片段组LC3BmRNA和蛋白相对表达量比较均无显著性差异。余各组间LC3BmRNA和蛋白相对表达量两两比较差异均有统计学意义;结论:1、sirt1在脓毒症内皮细胞中参与调控HO-1表达。2、sirt1参与调控脓毒症内皮细胞凋亡和自噬。
【作者】贺志飚;
【导师】陈平;
【作者基本信息】中南大学,临床医学,2014,博士
【关键词】脂多糖;脓毒症;脐静脉内皮细胞;凋亡;自噬;内皮细胞;血红素氧化酶-1;sir1;siRNA;

【参考文献】
[1]毕莹.孟加拉国麻纤维及麻浆粕项目的财务风险控制研究[D].吉林大学,工业工程,2013,硕士.
[2]卞宪伟.面向成熟代码的构件提取算法研究[D].东北大学,系统工程,2010,硕士.
[3]马攀.危险废物焚烧系统的数值模拟与试验研究[D].浙江大学,2012.
[4]董超.失谐Jaynes-Cummings模型中场与原子的量子特性[D].江西师范大学,光学,2004,硕士.
[5]常迎杰.数控滚齿机结构广义动态优化设计与研究[D].兰州理工大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[6]苗伟,张广清,原敏.安钢第一炼轧厂废钢料篮车称重及无线传输控制系统[J].冶金自动化,2003,S1:70-72.
[7]徐蕤.端氨基有机硅改性双酚F环氧树脂的研究[D].合肥工业大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[8]徐波.无线OFDM传输系统中的抗衰落技术[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2003,硕士.
[9]刘博.薄煤层液压支架电液控制系统研制[D].郑州大学,机械电子工程,2013,硕士.
[10]王杨.多维度可重构协议一致性测试系统的设计与实现[D].北京交通大学,2014.
[11]刘鹤龄.论高校公寓文化与大学生思想政治教育[D].安徽大学,思想政治教育,2013,硕士.
[12]闵海涛.单细胞凝胶电泳诱变检测系统的研究及应用[D].中国农业大学,基础兽医学,2004,硕士.
[13]张根社.企业家要树立市场经济的价值观[J].中国乡镇企业.2002(06)
[14]佟丽娜,侯增广,彭亮,王卫群,陈翼雄,谭民.基于多路sEMG时序分析的人体运动模式识别方法[J].自动化学报,2014,05:810-821.
[15]李丹.论小说中的“肌质”[D].内蒙古大学,文艺学,2013,硕士.
[16]马森,谢芳,王韵致,陈亮.基于光纤双波干涉的台阶高度在线高精度测量研究[J].光电子.激光,2014,09:1749-1753.
[17]郑起.油气储量资产评估方法研究[D].大连理工大学,工商管理,2003,硕士.
[18]王伟.分布式环境下个性化KDC代理的设计与实现[D].西安建筑科技大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[19]温礼勤.中小企业联保贷风险规避机制研究[D].安徽大学,金融,2013,硕士.
[20]潘学萍,薛禹胜,张晓明,钟志勇,黄杰波.轨迹特征根的解析估算及其误差分析[J].电力系统自动化,2008,19:10-14.
[21]袁帅.欧盟经济外交政策与决策机制研究[D].外交学院,国际关系,2014,硕士.
[22]唐继海.38CrMoAl钢氮碳共渗与激光淬火复合改性层的组织与性能[D].哈尔滨工业大学,材料学,2014,硕士.
[23]王金霞.现代OA系统的研究[D].大连理工大学,2002.
[24]朱建平,张润楚.数据挖掘的发展及其特点[J].统计与决策,2002,07:71-72.
[25]郭坤.中华汇业银行在华金融活动述论[D].河北师范大学,中国近现代史,2004,硕士.
[26]李静.遥感技术在海域使用动态监测系统中的应用[D].南京师范大学,海洋地理学,2012,硕士.
[27]杨晓晴.超声波在弹性固体介质中传播的FDTD仿真[D].青岛大学,机械电子工程,2013,硕士.
[28]林晨.AT分段供电网络潮流分析[D].西南交通大学,电气工程,2014,硕士.
[29]杨淑娟.内蒙古喜桂图县真猛犸象古DNA研究及真象亚科系统发育分析[D].中国地质大学,古生物学与地层学,2003,硕士.
[30]蔡梦波.国际文化贸易的法律冲突与协调[D].大连海事大学,法律,2013,硕士.
[31]刘丽华.行政规范性文件的备案审查制度研究[D].南昌大学,法律(专业学位),2012,硕士.
[32]刘家军.城市道路单向交通组织有效性研究[D].西南交通大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[33]蒋维彬,程英俊.自动售检票系统中自动充值机数量的计算[J].城市轨道交通研究.2003(03)
[34]刘禹杰.论柯亨对马克思历史唯物主义辩护之得失[D].吉林大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[35]岳雪莲.声波在多层介质中传播问题数值解[D].西北大学,计算数学,2013,硕士.
[36]彭珣.双线圈型磁流变阀流量关断特性研究[D].华东交通大学,机械电子工程,2013,硕士.
[37]武铭.网上交易中买家评价悖论的实证研究[D].太原科技大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[38]郑同波.文化产业商业模式研究[D].太原科技大学,企业管理,2013,硕士.
[39]汪阳.缝隙连接阻断剂1-庚醇对脑血管痉挛的抑制作用[D].江西医学院,神经外科学,2003,硕士.
[40]许磊.加权酉变换类—混沌图像加密系统研究[D].哈尔滨工业大学,应用数学,2014,硕士.
[41]霍兵勇.梁的振动分析和动力测试实验研究[D].湖南大学,振动理论及其应用,2014,硕士.
[42]崔广彬,李一军.模糊需求下物流系统CLRIP问题研究[J].控制与决策,2007,09:1000-1004+1016.
[43]梁春梅.北大金秋心理咨询特许经营发展研究[D].西安理工大学,工商管理,2004,硕士.
[44]康蕾.基于角色认同体验的大学生道德教育机制构建研究[D].兰州理工大学,思想政治教育,2013,硕士.
[45]王忠宁.W公司人力资源外包风险识别与控制分析[D].北京交通大学,2013.
[46]宋广林.不同来源玉米自交系的籽粒品质研究[D].西北农林科技大学,作物栽培学与耕作学,2011,硕士.
[47]谢可.我国住房公积金支持保障性住房建设研究[D].河北经贸大学,金融学,2014,硕士.
[48]景军锋.基于数字图像处理的织物外观特征研究[D].西安电子科技大学,机械电子工程,2013,博士.
[49]迟国泰,王际科.大连理工大学应用数学系,杜娟.基于灰色系统理论的商业银行竞争力评价模型[J].控制与决策,2006,03:347-351.
[50]李雪芬.管理信息系统开发结构的研究和应用[D].浙江大学,2006.

相关推荐
更多