柴胡疏肝散及拆方和活性成分阿魏酸对抑郁模型大鼠的生物方剂分析药理研究

【摘要】目的：用超高效液相色谱法测定柴胡疏肝散中有效成分的含量及经柴胡疏肝散灌胃后吸收入血的成分；比较研究柴胡疏肝散及其拆方和氟西汀对慢性应激模型诱导抑郁大鼠的行为学的影响,进一步研究柴胡疏肝散中的活性成分之一的阿魏酸和母方疗效的比较研究,并为下一步阐明柴胡疏肝散及其活性成分阿魏酸抗抑郁促胃肠动力的机制研究做铺垫。方法：(1)采用UPLC-PDA法测定柴胡疏肝散剂中的有效成分含量,色谱柱：ACQUITYBEHC18柱(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相：乙腈(A)-0.5%醋酸水(B),梯度洗脱,流速：0.5mL/min,柱温：40℃,检测波长：190-480nm。在以上色谱条件下,测得12中组分的含量：没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、甘草素、异甘草素12种成分的含量,绘制各个成分的标准曲线,并对其最低检测浓度、精密度、回收率、样本稳定性和重现性进行验证。采用UPLC-PDA法测定柴胡疏肝散汤剂中没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、甘草素、槲皮素、苯甲酰芍药苷、异甘草素和芒柄花素12种成分的含量,绘制各个成分的标准曲线,并对其最低检测浓度、精密度、回收率、样本稳定性和重现性进行验证。色谱柱：ACQUITYBEHC18柱(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相：乙腈(A)-0.5%醋酸水(B),梯度洗脱,流速：0.5mL/min,柱温：40℃,检测波长：190-480nm。(2)给正常SD大鼠灌胃柴胡疏肝散汤剂30mmin后取血,运用上述UPLC-PDA法对大鼠小肠组织匀浆液中有效成分进行定性检测。(3)将柴胡疏肝散及其组成药物(柴胡,香附、川芎、枳壳、甘草、白芍、陈皮进行拆方研究,将其与阳性药氟西汀对慢性应激模型所致抑郁大鼠进行干预,分别检测大鼠体重的变化的行为学指标的差异：糖水偏好实验,强迫游泳实验和敞箱实验。并将其进行组间比较。(4)将柴胡疏肝散和其被吸收入靶器官后被检测出的活性成分阿魏酸进行比较研究,将其与阳性药氟西汀对慢性应激模型所致抑郁大鼠进行干预,分别检测大鼠体重的变化的行为学指标的差异：糖水偏好实验,强迫游泳实验和敞箱实验。,并将其进行组间比较。并进一步进行其胃肠动力实验,验证阿魏酸有抗抑郁促动力的设想。结果：(1)建立了一个简单、快速和灵敏的能同时检测柴胡疏肝散汤剂中12种成分的UPLC-PDA法。色谱图中各成分的色谱峰分离完全,无杂峰干扰。12种成分在其线性检测范围内显示出良好的线性回归,r2>0.9992。该方法日内、日间精密度良好,其相对标准差(RSD)波动在1.87%-5.61%之间；柴胡疏肝散12种成分的加样回收率良好,平均加样回收率在96.13%-102.46%之间,RSD<6.74%。柴胡疏肝散汤剂样本在24小时内稳定性好,RSD波动在0.78%-2.98%。柴胡疏肝散汤剂重现性好,RSD波动于1.94%-5.36%。经UPLC-PDA方法检测后,柴胡疏肝散汤剂中没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、甘草素和异甘草素12种化学成分被定量分析。(2)灌胃柴胡疏肝散汤剂30mmin后健康SD大鼠的血浆中可测出阿魏酸成分。(3)经过比较分析,慢性应激模型动物经过柴胡疏肝散及其拆方干预2周后,全方组模型动物体质量增长明显,水平穿越格数、竖立次数、糖水消耗和糖水偏爱百分比均显著增加,拆方各单味组、氟西汀组各项指标均无显著改变。4周后全方组上述各项指标得到进一步改善；川芎组、柴胡组和枳壳组上述各项指标部分出现显著改善；陈皮组,香附组,白芍组,甘草组各项指标均无显著改变；氟西汀组上述各项指标也得到明显改善。4周后,全方组与氟西汀组体质量及各项行为学指标比较,差异均无明显统计学意义；与川芎组大鼠体重增长数、水平穿越格数、竖立次数、糖水消耗和糖水偏爱百分比各指标比较,差异均有显著性。说明柴胡疏肝散全方组在改善抑郁模型体质量增长数和各项行为学指标方面比氟西汀早,效果与氟西汀相当；川芎组能改善抑郁模型部分行为学指标,柴胡和枳壳组较之川芎改善抑郁模型指标较弱,而甘草组基本不能改善模型动物抑郁行为,全方明显优于拆方。(4)FA类似于柴胡疏肝散,二者能发挥类似于氟西汀的抗抑郁作用,且能同时诱导强迫游泳大鼠的抗抑郁样作用和促胃肠动力作用,明显不同于氟西汀组,氟西汀在不能改善胃肠排空实验中的胃排空延迟的现象,而FA确有着和全方组同样的抗抑郁促动力作用,这提供了柴胡疏肝散多靶点抗抑郁的被吸收生物活性成分依据。
【作者】谢伟彬；
【导师】黄熙；
【作者基本信息】中南大学，中西医结合临床，2014，博士
【关键词】抑郁症；柴胡疏肝散；慢性轻度不可预见性应激模型；阿魏酸；可吸收活性成分；生物方剂分析药理；

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