肾小管上皮细胞在CCL20招募Th17过程中的作用

【摘要】背景Thl7作为新发现的一类辅助性T细胞亚群,不仅作用于清除胞外病原体,而且参与自身免疫及炎性疾病,其效应主要通过产生IL-17实现。Th17高表达趋化因子受体CCR6,与其唯一的高特异性配体CCL20趋化因子成对,介导了Th17的募集。研究发现,肾脏组织中CCL20主要由肾小管间质的浸润细胞以及肾小管上皮细胞产生。此外有文献报道IL-17可刺激气道上皮细胞产生CCL20。因此,本研究推测：IL-17作为一种炎症介质可能刺激肾小管上皮细胞产生趋化因子CCL20,从而提示肾小管上皮细胞除履行自身非免疫细胞功能外,在炎症状态下尚具备招募Th17的潜能。目的本研究拟探讨IL-17作为一种炎症介质是否可以刺激肾小管上皮细胞产生趋化因子CCL20。方法1.细胞培养用完全培养基(10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素的1:1DMEM/F12培养液)常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2)。2.免疫细胞化学HK-2爬片经处理后以特异性一抗(E-cad,CK-18)孵育,对照组使用PBS代替一抗,后经二抗作用,DAB显色。3.IL-17处理随机分组,用梯度浓度(0,1,10,100ng/mL)的IL-17刺激HK-2,以研究剂量效应关系,分别于24h收样行RT-PCR检测,48h收样行ELISA检测；随机分组,以10ng/mLIL-17刺激HK-2于不同时间(6,12,24,48h)终止处理,以研究时间效应关系。4.RT-PCR分析用TRIzol法提取总RNA,逆转录为cDNA后进行分析。mRNA相对表达量通过2-△△C表示。每组实验均至少重复3次。5.ELISA检测用ELISA检测CCL20的分泌,得到OD值代入标准曲线回归方程以计算CCL20浓度。每组实验均至少重复3次。6.统计分析所有数据以均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计分析软件进行数据处理。经正态性和方差齐性检验后,采用单因素／ANOVA用于判定显著性差异,P<0.05被认为有统计学意义。结果1.与对照组相比,E-cad和CK18在HK-2细胞中表达阳性。2.与对照组相比,IL-17显著促进CCL20的mRNA表达和蛋白分泌(P<0.05),并且呈剂量和时间依赖性。结论IL-17作为一种炎症介质可刺激肾小管上皮细胞产生趋化因子CCL20,从而提示肾小管上皮细胞除履行自身非免疫细胞功能外,在炎症状态下尚具备招募Thl7的潜能。
【作者】蒲佳曦；
【导师】肖平；周巧玲；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】CCL20；Th17；IL-17；肾小管上皮细胞；CCR6；

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