艰难梭菌多位点序列分型及感染危险因素的流行病学

【摘要】目的：1、研究某三级甲等医院重症监护室(ICU)抗生素相关性腹泻(AAD)患者艰难梭菌检出情况,艰难梭菌毒素携带特征,同时使用多位点序列分型(MLST)、随机引物PCR分析(RAPD),了解本地区艰难梭菌的基因型别,主要流行菌株,并以MLST为参考,比较RAPD方法是否适合艰难梭菌分型。本研究数据可与国际上其他地区流行菌株进行比较并补充艰难梭菌MLST数据库。2、研究AAD患者中艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)的构成比,CDAD患者在ICU住院患者的发病率,并通过多因素分析比较非艰难梭菌导致的AAD与CDAD患者在感染危险因素方面的差异。为临床治疗、预防、监测CDAD,并制定合理的防治方案提供数据支持。方法：对2013年6月-2014年2月期间,某院综合ICU、神经内科ICU、神经外科ICU、呼吸ICU发生AAD的患者取大便标本使用CDMN选择性培养基进行厌氧培养。通过常规培养+分子生物学技术鉴定艰难梭菌。随后对其A、B毒素基因tcdA、tcdB,二元毒素基因cdtA、cdtB进行扩增,了解毒素携带情况。对艰难梭菌7个管家基因进行扩增、测序,通过MLST数据库获得基因ST型,采用RAPD方法对艰难梭菌进行分型,crosschecker得出矩阵,NTsys2.10e软件clustering功能分析得出的树状图。使用bionumerics软件对MLST和RAPD数据及艰难梭菌基本信息构建复合树状图,并进行两种方法的比对。以ICU患者住院日为分母,医疗机构发生的医院感染CDAD(HOHACDAD)患者数为分子,得出CDAD发病率。通过填写艰难梭菌感染患者调查表,并使用Epidate录入数据,使用SPSS13.0对数据进行分析,对单因素计量资料采用t检验,计数资料采用卡方检验,对多因素采用Backward:LR法进行逐步Logistic回归分析。结果：1.从4个ICU的394例患者725份标本中共分离出40株艰难梭菌,其中32株来源于非重复患者标本,主要来自于综合ICU12株,神经内科ICU23株,神经外科ICU5株,呼吸ICU未检测到艰难梭菌。有25株检测出tcdA,33株检测出tcdB,艰难梭菌毒素A+B+菌株25株,占62.50%,A-B+菌株8株,占20.00%,A-B-菌株7株,占17.50%,未检测出A+B-菌株。检测到一株cdtA和cdtB基因阳性艰难梭菌。2.40株艰难梭菌经MLST分析共分为9个ST型,来源于3个clade,ST54(9株)、ST39(7株)、ST26(6株)、ST3(4株)、ST37(3株)、ST35(2株)、ST48(2株)、ST2(2株),ST17、ST201、ST33、ST133分别为1株,其中ST201,clade3为二元毒素阳性菌株。另外本研究中发现一株新的ST型别,经提交MLST数据核实为ST274。RAPD基因指纹图谱分型,共有27个型别,其中最常见的为R20型,共有5株,其次为R13型4株,R6有3株,其余型别均有1-2株。将RAPD旨纹图谱与ST型进行聚类分析,发现R20型对应的ST型别为ST26,R13对应ST54,R6对应ST37,由于存在单个条带的差异,ST39分布在R1-R5之间,而R1-R5相互之间是亚型的关系。3.HOHACDAD发病率为16.60/10,000住院日,其中神内ICU的HOHACDAD发病率为42.82/10,000住院日,CDAD占AAD患者构成比为8.12%(32/394)。4.CDAD与AAD中非CDAD患者对比,经单因素分析,过去一个月使用抗生素(贮值=12.30,P=0.00)、胃肠外营养(χ2值=4.72,P=0.03)、腹泻前住院天数(t=-2.12,P=0.03),腹泻前使用抗生素天数(t=-1.99,P=0.05)4个危险因素。经多因素Logistic回归分析,一月前使用抗生素,腹泻前的住院天数,是导致住院患者CDAD的危险因素。其中一月前使用抗生素对未使用抗生素导致CDAD的发病比数比例高达7.30倍,腹泻前住院天数每增加一个等级CDAD的发病比数比例为2.28。结论：1.本研究医院中艰难梭菌毒性携带特征以毒素A+B+为主；2.艰难梭菌ST型别以ST54、ST39、ST26为主；3.RAPD分型方法用于艰难梭菌分子流行病学分析也具有较高的分辨率；4.某院ICU患者HOHACDAD发病率较高；5.CDAD与AAD中非CDAD患者相比具有明显的感染因素。
【作者】李春辉；
【导师】吴安华；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】艰难梭菌；CDAD；AAD；tcdA/tcdB；MLST；RAPD；

【参考文献】
[1]张亚东.基于立体视觉的P-GMAW熔池表面形貌三维重建研究[D].河北科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[2]杨颖.论国家豁免制度的新发展[D].外交学院,国际法,2014,硕士.
[3]韩晓琳.政府采购供应商救济制度研究[D].北方工业大学,法律,2014,硕士.
[4]马啸.世界优秀左手男子乒乓球运动员技战术分析[D].山东师范大学,体育（专业学位）,2013,硕士.
[5]惠颖.两个棉花14-3-3蛋白相互作用蛋白质的筛选与鉴定[D].南京农业大学,遗传学,2011,硕士.
[6]袁小.女性董事能否降低企业内部薪酬差距？[D].厦门大学,会计学,2014,硕士.
[7]吕晓宁.民办养老机构优化研究[D].首都经济贸易大学,社会保障,2014,硕士.
[8]罗跃辉.车辆牵引力、速度与滑转率相关性研究[D].河南科技大学,车辆工程,2013,硕士.
[9]王悦.审计和薪酬委员会人员重合度与高管薪酬业绩敏感度实证分析[D].江西财经大学,会计学,2013,硕士.
[10]郑珊珊.高校移动图书馆服务评价研究[D].安徽大学,情报学,2014,硕士.
[11]黄荣松.市郊铁路合理站间距的研究[D].北京交通大学,2014.
[12]于淼.基于Struts框架的节能发电调度信息系统的设计和实现[D].东北大学,软件工程,2011,硕士.
[13]辛瑞峰.304不锈钢连铸结晶器保护渣理化性能研究[D].内蒙古科技大学,冶金工程,2014,硕士.
[14]商哲一.新型碳材料薄片电极的制备、评价及应用[D].江南大学,2014.
[15]王在刚.海洋立管流固耦合动力特性分析[D].兰州理工大学,化工过程机械,2013,硕士.
[16]周琪龙.黄土沟壑区土壤侵蚀与浅层滑坡相关关系研究[D].兰州大学,地质工程,2013,硕士.
[17]方小英.裸碳离子碰撞氦原子单电离全微分截面的理论分析[D].山西师范大学,原子与分子物理,2014,硕士.
[18]姜泽毅,张欣欣,董补全,陈晓丹,于百勤,夏建良,刘华飞.环形加热炉在线优化控制的研究与应用[J].冶金自动化,1999,05:28-31.
[19]刘锐.精馏型自复叠天然气液化系统的理论与实验研究[D].浙江大学,制冷及低温工程,2013,硕士.
[20]柯清.中庸思想的三大维度研究[D].华中师范大学,伦理学,2013,硕士.
[21]申家杰.RZ市计量测试所工作质量改进研究[D].山东大学,工业工程（专业学位）,2012,硕士.
[22]侯志强.基于Web的高职学习评价系统设计与实现[D].山西师范大学,教育技术学,2014,硕士.
[23]李晓琳.论刘熙载书论中文学思想的渗透[D].吉林大学,历史文献学,2004,硕士.
[24]韩雪.基于可持续视角的旅游用地模式研究[D].新疆农业大学,土地资源管理,2012,硕士.
[25]吴丹华.个人住房抵押贷款保险研究[D].中国社会科学院研究生院,区域经济学,2003,硕士.
[26]姜雅彦.QIC-三坐标测量机数控系统[D].天津大学,仪器仪表,2004,硕士.
[27]费明军.农村教学背景下初中化学实验的改进与创新研究[D].淮北师范大学,学科教育,2014,硕士.
[28]王东霞.基于压缩感知的信号恢复算法研究[D].华中科技大学,计算数学,2013,硕士.
[29]钟晓华.行动者的空间实践与社会空间重构[D].复旦大学,城市社会学,2012,博士.
[30]郑菲菲.基于数值分类的分形图像压缩算法研究[D].兰州理工大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[31]朱荣华.高桩墩式码头结构计算与优化系统的开发[D].大连理工大学,结构工程,2003,硕士.
[32]李亦云.A Case-based Report on Press Conference Interpreting Corpus Construction[D].西安外国语大学,MTI翻译,2014,硕士.
[33]乔丹.山地城市跨江通道规划布局研究[D].重庆交通大学,交通运输规划与管理,2012,硕士.
[34]高莎莎.基于博弈论的Ad Hoc网络节点合作方法研究[D].燕山大学,精密仪器及机械,2014,硕士.
[35]罗万俊.远隔肢体缺血时处理对心脏瓣膜置换术器官保护的研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[36]杨笑男.基于GIS的青藏铁路拉日段地质灾害危险性预测评价[D].中国地质大学（北京）,建筑与土木工程,2014,硕士.
[37]赵振宏.宏济堂制药集团主导产品山东目标市场营销策略研究[D].吉林大学,工商管理,2013,硕士.
[38]陆慧敏.杭州中山中路历史街区建成环境评价[D].浙江大学,建筑与土木工程,2012,硕士.
[39]卢琴.有序介孔碳/金属酞菁协同催化降解染料的研究[D].浙江理工大学,材料学,2013,硕士.
[40]王国森.基于页面链接挖掘的Internet信息资源检索[J].图书情报工作,2005,09:91-93+117.
[41]芮小平,张彦敏.空间信息可视化挖掘研究[J].测绘科学,2005,02:64-66+6.
[42]陶千山.IL-35诱导急性髓细胞白血病细胞免疫逃逸的作用及机制[D].安徽医科大学,内科学,2014,博士.
[43]胡晓红,张健.法德GSM-R系统考察报告[J].铁道通信信号.2006(05)
[44]邱怡婷.基于天然及重组乳糜微粒模型的亲脂性药物口服经淋巴吸收的机制研究[D].复旦大学,药剂学,2011,硕士.
[45]刘畅.骨髓增殖性肿瘤JAK2 V617F、exon12及MPL突变的研究[D].湖南师范大学,内科学,2013,硕士.
[46]傅齐纨.王弼《老子注》“本末”思想及诠释方法[D].华侨大学,哲学,2014,硕士.
[47]宋光雄,何永勇,褚福磊.汽轮机振动故障诊断知识信息服务系统[J].电力系统自动化,2006,01:78-82.
[48]郑丽春.Ephrin-B2对人脐静脉内皮细胞功能的影响及其蛋白质组学研究[D].厦门大学,内科学,2014,硕士.
[49]王婷.两类高余维的异维环的分支问题[D].华东师范大学,应用数学,2013,硕士.
[50]刘帅.继电保护综合测试系统软件平台开发[D].华中科技大学,水利水电工程,2013,硕士.