花脸香蘑（Lepista sordida）人工栽培及多糖结构分析

【摘要】花脸香蘑(Lepistasordida)香味浓郁,味道鲜美,是一种具有较高食用与药用价值的珍贵食用菌,能够进行人工栽培,但由于技术不成熟,产量不高,尚未进行大规模商业化生产。多糖是食用菌中最广为人知、最有效的抗肿瘤和免疫调节活性物质,国内外学者已经对700多种担子菌的多糖进行了研究,相比之下,花脸香蘑多糖的研究才刚刚开始。本文探索了花脸香蘑高产栽培模式,筛选出高产配方,为早日实现规模化生产提供理论依据；进行多糖提取工艺研究,优化出最佳提取工艺条件,并对分离纯化后得到的子实体多糖进行初步结构分析,以期为花脸香蘑多糖资源的开发利用打下良好的基础。主要研究内容如下：1、首先对野生香蘑产量较大的齐齐哈尔市甘南县双河农场、牡丹江市镜泊湖自然风景区和牡丹江三道关自然保护区等三地的生态环境进行了调查和香蘑子实体采集,并对采集的子实体进行了菌种分离,获得3个菌株,编号分别为S1(齐齐哈尔)、J1(镜泊湖)和M1(三道关)。在对这3个菌株依据子实体形态特征进行初步分类鉴定的基础上,从基因的GeneBank中选取了15个香蘑属菌株及1个栓菌属菌株,与3个菌株的ITS序列进行比对并建立系统发育树。结果显示,包括J1和M1在内的9个紫丁香蘑菌株聚为一类,且彼此之间遗传距离较短,而包括S1在内的9个花脸香蘑菌株聚为一类,且遗传距离也很接近,由此确定,J1和M1为紫丁香蘑,S1是花脸香蘑。2、进行了花脸香蘑大棚覆土与仿野生两种出菇方式对比的栽培试验研究,结果显示,两者覆土后至现蕾时间相同,出菇时温度条件也接近；大棚内产出的花脸香蘑比较粗壮,没有香味,仿野生栽培的子实体比较单薄,与野生采集的相近,有的具备其特有的香气；仿野生栽培产量高于大棚覆土栽培,前者生物学转化率为36.8%,后者仅为17.38%。然后进行了配方对比试验研究,结果表明,随着玉米芯添加比例的增加,菌丝生长速度呈上升趋势,添加比例最大的配方六菌丝生长速度最快,达到了3.95mm/d,而配方三(木屑48%,玉米芯32%,麦麸18%,石膏1%,石灰1%)的生物学转化率最高,为28.4%。3、以人工栽培的花脸香蘑分离获得的菌株为研究对象,对菌丝体进行碳源和氮源利用能力试验,通过比较菌丝体麦角固醇含量可以发现,果糖、甘露糖、纤维二糖、蔗糖、葡萄糖和麦芽糖都可以作为花脸香蘑菌丝体生长的碳源,但相比之下,果糖、甘露糖和纤维二糖是更为理想的碳源；比较多糖产量结果发现,选择果糖作为碳源,多糖产量最高；丙氨酸、甘氨酸、黄豆粉和蛋白胨都可以作为氮源使用,添加丙氨酸的培养基中,菌丝生长效果最好；而含有黄豆粉的培养基中,则是多糖产量最高；尿素则不能被花脸香蘑菌丝所利用。4、以齐齐哈尔双河农场采集的野生花脸香蘑子实体为材料,进行了热水浸提法提取多糖试验,通过单因素试验研究了浸提时间、浸提温度、料水比、提取次数对多糖得率的影响,并在单因素试验的基础上,进行正交试验获得最佳提取工艺。结果显示,影响花脸香蘑多糖提取率各因素大小顺序为,提取温度>料水比>提取时间,提取温度影响最大,其次是料水比,且差异性显著(P<0.01)。同时优化出热水提取花脸香蘑子实体多糖最佳工艺条件为：浸提温度650C、浸提时间5h、料水比1：40(g/mL),在该条件下多糖得率高达10.39%,RSD仅为1.33%,证明优化实验获得的工艺条件重现性好,稳定可行。5、以驯化栽培的花脸香蘑菌丝体为原料,进行了热水浸提法提取多糖试验,通过单因素试验研究了浸提时间、浸提温度、液料比、提取次数对多糖得率的影响,并在单因素试验的基础上,进行正交试验获得最佳提取工艺。结果表明,影响花脸香蘑多糖提取率各因素大小顺序为,提取温度>提取时间>液料比,提取温度对多糖提取率影响最大,且差异显著,提取时间影响在其次。同时优化出热水提取花脸香蘑菌丝体多糖最佳工艺条件为：浸提温度95℃、浸提时间3h、料液比1：40(g/mL),在该条件下提取多糖,得率高达9.41%,RSD仅为1.45%,证明优化实验获得的工艺条件重现性好,稳定可行。6、采用热水浸提、乙醇浓度分别为30%、60%和80%情况下分步进行醇沉的方法提取野生花脸香蘑子实体粗多糖,得到3种多糖组分,分别命名为LSP-30、LSP-60和LSP-80,它们的总糖含量分别为64.0%,41.4%和17.2%。进一步研究显示,多糖LSP-30主要由甘露糖(Man),葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)三种单糖组成,含量分别为23.0%、49.2%和27.8%；用SephroseCL-6B层析柱根据分子量不同对LSP-30进行分级纯化,得到LSP-30-a和LSP-30-b两个级分,分子量分别约为600KDa和10KDa。LSP-60主要由Man、Glc、和Gal三种单糖组成,它们的含量分别为31.6%、46.4%和22.0%；用SephadexG-75层析柱对LSP-60进行纯化,结果表明LSP-60分子量分布范围较广且不均一,分子量约为1KDa。LSP-80主要由Man、Glc、Gal和Rha(鼠李糖)四种单糖组成,含量分别为17.4%、68.0%、11.6%和3.0%；用Bio-GelP-2层析柱根据分子量不同对LSP-80进行分级纯化,得到LSP-80-a、LSP-80-b和LSP-80-c三个级分,分子量分别为1KDa,700Da和400Da。对LSP-80-a,LSP-80-b,LSP-80-c的单糖组成进行分别测定,结果表明,LSP-80-a主要由Man,Glc,Gal组成,含量分别为44.9%、34.4%和20.7%；LSP-80-b主要由Man,Glc,Gal,Rha组成,含量分别为20.5%、60.3%、16.4%和2.8%；LSP-80-c由Man,Glc,Gal和Rha组成,含量分别为12.2%、50.7%、10.1%和27.0%。
【作者】伦志明；
【导师】池玉杰；
【作者基本信息】东北林业大学，森林保护，2014，博士
【关键词】花脸香蘑；人工栽培；多糖提取；多糖结构分析；

【参考文献】
[1]康琦,张燕,汪镭,吴启迪.群体智能应用综述[J].冶金自动化,2005,05:7-10+25.
[2]位自英,李亚珂,郭东杰,方少明.3D石墨烯/NiO纳米复合膜制备高容量超级电容器[A].河南省化学会.河南省化学会2014年学术年会论文摘要集[C].河南省化学会:,2014:1.
[3]张静.西式快餐产品伤害危机对品牌关系断裂影响研究[D].江西财经大学,企业管理,2013,硕士.
[4]江海燕,周春山,高军波.西方城市公共服务空间分布的公平性研究进展[J].城市规划,2011,07:72-77.
[5]蒋龙飞.PAA模板法制备PANI有序纳米阵列及其在电化学电容器中的应用[D].南京理工大学,材料工程,2013,硕士.
[6]任旭虎,马帅,赵仁德,许强.基于自适应陷波滤波器的基波与谐波有功功率分别计量[J].电力系统自动化,2011,16:66-70.
[7]柏婧.关于室内臭氧浓度变化规律及来源的研究[D].天津大学,供热、供燃气、通风与空调工程,2004,硕士.
[8]严钦男.钢轨缺陷的超声导波检测研究[D].武汉纺织大学,物理电子学,2014,硕士.
[9]黄雪骄.基于多模干涉光纤结构的光纤激光传感特性研究[D].哈尔滨工业大学,光学,2014,硕士.
[10]陆琳琳.高大平房仓内粮食摩擦与压缩特性研究[D].南京财经大学,农产品加工及贮藏,2012,硕士.
[11]王源鼎.龟鹿二仙汤治疗膝关节骨关节炎的中医临床研究[D].广州中医药大学,中医诊断学,2013,硕士.
[12]万一.人TNF-α自体疫苗的研究[D].第四军医大学,生物化学与分子生物学,2004,硕士.
[13]李伟.典型城市道路机动车排放污染特征研究[D].清华大学,环境工程,2002,硕士.
[14]范晓庆,陈枫,杨晋涛,范萍,费正东,张卫华,徐淑芬,钟明强.聚酰胺46/氧化石墨烯纳米复合材料结晶性能和热性能[J].高分子材料科学与工程.
[15]程娜.抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体对致病香鱼保护作用的研究[D].宁波大学,农业推广（专业学位）,2014,硕士.
[16]韩宝仁.适应山区铁路运用的3B0轴式DF4C型内燃机车的可行性分析[J].铁道机车车辆.1998(04)
[17]唐兴峰.第一次台海危机研究[D].华中师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[18]程海明.油液监测专家系统的知识挖掘研究[D].武汉理工大学,2004.
[19]俞翔.沪教版初中文言文注释研究[D].华东师范大学,学科教学,2012,硕士.
[20]姚兴财.股价指数、CDS定价及其关联性研究[D].暨南大学,金融学,2013,硕士.
[21]沈艳霞,林瑾,纪志成.神经网络磁链估计的感应电机反步法研究[J].控制与决策,2006,07:833-836.
[22]张世平.论新闻舆论监督权[D].湘潭大学,法律,2003,硕士.
[23]安兵.需求与供给视角下的城市社区养老服务研究[D].湖南师范大学,社会保障,2013,硕士.
[24]陈新.中国石油集团公司IT管理研究[D].北京交通大学,2013.
[25]朱洪涛.臭氧—微滤工艺处理二级出水过程中的膜污染及控制机理[D].清华大学,2009.
[26]李明毅,惠晓峰.上市公司信息披露与资本成本:来自中国证券市场的经验证据[J].管理学报,2008,01:88-95+127.
[27]刘冰.基于自组织理论的群体性劳资冲突事件的演化及应对对策[D].首都经济贸易大学,劳动经济学,2013,硕士.
[28]李小利.外生菌根真菌菌株耐盐碱性筛选以及黑松（Pinus thunbergii Parl.）菌根苗合成、耐盐碱性研究[D].南京农业大学,植物学,2013,硕士.
[29]江宏军.职务犯罪侦查一体化研究[D].安徽大学,法律,2012,硕士.
[30]扈家瑞.吉林省中小企业解困及转型研究[D].吉林大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[31]何岩.以黄芪双叶颗粒辅助治疗IgA肾病（气阴两虚证）的随机对照试验[D].北京中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[32]邹静.基于DSP的车道偏离预警系统中图像处理方法的研究[D].长安大学,车辆工程,2013,硕士.
[33]王维.低碳产业技术链信息生态系统的构成及运行机制研究[D].吉林大学,情报学,2014,硕士.
[34]王镝,吴青泉,王国仁,于戈.生物序列模式分析中神经网络的并行训练策略[J].计算机科学,2004,03:130-133+178.
[35]杨璐.基于贵金属纳米线的葡萄糖无酶传感和燃料电池研究[D].湖南师范大学,分析化学,2014,硕士.
[36]侯鹏飞.浅谈高纯度色彩在油画中的运用[J].艺术科技,2013,08:128.
[37]惠喜强.螺纹插装式平衡阀动态特性和内流场的研究[D].兰州理工大学,机械电子工程,2013,硕士.
[38]郭惠琳.马来西亚陷入“中等收入陷阱”的原因分析和政策应对[D].厦门大学,世界经济,2013,硕士.
[39]程小峰.大株红景天注射液应用于肺癌化疗患者的临床研究[D].福建中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[40]李伟杰.基于UWB信号室内定位系统性能优化研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[41]刘颖录.名人微博的公共责任[D].辽宁大学,传播学,2012,硕士.
[42]薛伟江,丁滔,王继刚.石墨烯/酚醛树脂复合材料的制备及性能研究[A].中国仪表功能材料学会、重庆材料研究院、哈尔滨工业大学、《功能材料》期刊社.第八届中国功能材料及其应用学术会议摘要[C].中国仪表功能材料学会、重庆材料研究院、哈尔滨工业大学、《功能材料》期刊社:,2013:1.
[43]王凯,张翠平,胡福良.2013年国内外蜂胶研究概况(一)[J].蜜蜂杂志,2014,03:1-5.
[44]江云,王谨,龚向阳,张峭巍,何非方,胡兴越.42例自发性脊髓脑脊液漏所致颅内低压的临床特点分析[J].浙江大学学报(医学版),2014,01:83-88.
[45]吕爽.池田大作中日友好思想探究[D].渤海大学,世界史,2014,硕士.
[46]何雨珂.城市湿地植物景观研究[D].西南交通大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[47]王立超.当代国内歌剧院观演空间设计研究[D].北京建筑大学,建筑学,2013,硕士.
[48]王平.氮掺杂石墨烯和碳化钼/石墨烯复合纳米材料的电催化性能研究[D].中国科学技术大学,2014.
[49]李志明,J.F.Claerbout,R.A.Ottolini.用双向外推法偏移翻转反射波[J].石油地球物理勘探,1985,01:1-8.
[50]齐鑫.ERCP与PTCD治疗急性胆管炎的对比观察[D].大连医科大学,消化内科学,2012,硕士.