新生儿细菌感染性肺炎呼吸道的菌群多样性研究

【摘要】目的呼吸机相关性肺炎(ventilator-associatedpneumonia,VAP)是机械通气新生儿常见的并发症和死亡原因，但确定致病菌还存在困难。本实验通过前瞻性地动态分析VAP与呼吸道菌群组成和多样性的相互关系，探讨可反映VAP发生的指标。方法实验组是呼吸窘迫综合征（respiratorydistresssyndrome,RDS）合并VAP的新生儿（简称RVAP组），对照组的新生儿未合并VAP（简称RDS组）。在上机后0～1天、1～3天和3～5天各采集1次痰液标本。标本经细菌DNA的提取、PCR扩增反应、DGGE、克隆及测序，结果与数据库进行BLAST比对。采用QuantityOne软件对DGGE图片的条带数目和相似度进行测定，并计算香农-威纳指数(Shannon-Wienerdiversityindex)。结果1.插管1～3天，RDS组的丰富度和香农-威纳指数高于RVAP组（P<0.05）；而插管1天内和3～5天，两组之间无差别。2.插管1天内，RDS组与RVAP组菌属的总体构成比无差异；插管1～3天，RVAP组克雷白杆菌属、不动杆菌属和链球菌属的构成比大于RDS组，沙雷氏菌属和无色杆菌属小于RDS组；插管3～5天，RVAP组链球菌属的构成比仍大于RDS组，而其它4个菌属小于RDS组。结论RDS患儿呼吸道菌群多样性降低，以及克雷伯菌属、链球菌1本实验受国家自然科学基金No.8107513，No.81370744和No.30901279资助属和不动杆菌属增加伴沙雷氏菌属和无色杆菌属减少，对发生VAP有警醒作用。目的细菌感染性肺炎（infectiouspneumonia）是新生儿死亡的主要原因之一，部分患儿并发VAP后死亡率更高，但确定致病菌还存在困难。本实验通过前瞻性地动态分析感染性肺炎和VAP与呼吸道菌群组成和多样性的相互关系，探讨肺炎新生儿下呼吸道细菌的变化和可反映VAP发生的指标。方法实验组是细菌感染性肺炎未合并VAP（简称IP组）及合并VAP（简称IVAP组）的新生儿，对照组的是RDS未合并VAP（简称RDS组）新生儿。在上机后1、3、5天内各采集1次痰液标本。标本经细菌DNA的提取、PCR扩增反应、DGGE、克隆及测序，结果与数据库进行BLAST比对。采用QuantityOne软件对DGGE图片的条带数目和相似度进行测定，并计算香农-威纳指数。结果1.插管1天内，RDS组、IP组和IVAP组的丰富度和香农-威纳指数无差别；插管1～5天，RDS组>IP组>IVAP组。2.插管1天内，IP组与IVAP组的菌群无差异。RDS组沙雷氏菌属和不动杆菌属的构成比大于IP组和IVAP组，而克雷伯菌属、无色杆菌属和链球菌属小于后两组；插管1～3天，克雷伯菌属和链球菌属的构成比在IVAP组>IP组>RDS组，沙雷氏菌属和无色杆菌属的构成比在IVAP组<IP组<RDS组，不动杆菌属的构成比在IP组<IVAP组<RDS组；插管3～5天，RDS组与IP组无差异。IVAP组沙雷氏菌属、无色杆菌属、不动杆菌属和克雷伯菌属的构成比均小于RDS组与IP组，而链球菌属的构成比大于后两组。结论1.肺炎新生儿下呼吸道细菌的失衡使菌群的多样性降低，并且感染越重，多样性越低。2.感染性肺炎新生儿下呼吸道菌群多样性的进一步简单化，以及克雷伯菌属、链球菌属的构成比继续增加和沙雷氏菌属、不动杆菌属的进一步减少，对发生VAP有警醒作用。目的确定细菌感染性肺炎致病菌的金标准是从下呼吸道分泌物中培养出流行菌株，但在很多情况下却无法采集到新生儿的下呼吸道分泌物。本部分实验将探讨能否用咽拭子的培养结果辅助确定肺炎的病原菌。方法实验组分别是RVAP组、IP组和IVAP组，对照组的是RDS组。在上机后1、3、5天内各采集1次咽拭子标本。标本经细菌DNA的提取、PCR扩增反应、DGGE、克隆及测序，结果与数据库进行BLAST比对。分析各组咽拭子中的菌群组成。同时，每个病人至少送1次痰培养检查。结果通过与第一、二部分的比较可知：1.肺炎患儿的上、下呼吸道有7种共同的菌属，分别是克雷伯菌属、沙雷氏菌属、链球菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、葡萄球菌属和假单胞菌属。2.上、下呼吸道包含的细菌种类、菌群的总体构成比、两两比较和具体的某一个菌属的比较关系都不完全相同。同时，共有71份痰液送检培养，其中39份培养出正常菌群或致病菌。致病菌分别是肺炎克雷伯杆菌亚种、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌，这三种细菌归属的克雷伯菌属、不动杆菌属和假单胞菌属是上、下呼吸道的共同菌属。结论咽拭子培养出上、下呼吸道的共同菌属可能有助于确定肺炎新生儿的致病菌。
【作者】陆韦；
【导师】余加林；
【作者基本信息】重庆医科大学，儿科学，2014，博士
【关键词】微生物群落；多样性；新生儿；呼吸道；呼吸机相关性肺炎；肺炎；咽拭子；

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