基于对成纤维细胞调控探讨益肾化瘀法治疗盆腔炎性疾病后遗症机制

【摘要】目的：探讨中医学、西医学对盆腔炎性疾病后遗症的认识及益肾化瘀法治疗盆腔炎性疾病后遗症相关机制,明确益肾化瘀法对盆腔炎性疾病后遗症过程中成纤维细胞增殖的干预机制及与益肾法、化瘀法机制差异。方法：通过文献研究,梳理盆腔炎性疾病后遗症相关认识；通过益肾化瘀法改善盆腔炎性疾病后遗症以及女性生育力的临床研究,探讨益肾化瘀方临床疗效。通过体外实验,分别以不同浓度的YSHY、YS、HY方作用于体外培养的NIH/3T3细胞,以MTT法检测细胞增殖。观察不同药方对bFGF、TGF-β、HOP表达的影响。探讨不同药方对细胞外基质表达的影响,如HA、Ⅲ型胶原蛋白等。探讨对成纤维细胞Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响,观察不同药方对成纤维细胞STAT6信号转导通路的影响。结果：临床研究发现益肾化瘀序贯组总有效率优于对照组(P<0.05),躯体功能障碍、社会心理损伤等评分较对照组及中药组下降,差异非常显著(P<0.01)。临床研究还发现治疗组、对照组患者治疗后VAS评分均较治疗前降低,差异非常显著(P<0.01),临床妊娠率治疗组显著高于对照组(P<0.05)。治疗组消化系统和总的不良反应发生率低于对照组,差异显著(P<0.05)。体外实验发现益肾化瘀方能够有效抑制成纤维细胞增殖及其相关细胞因子的表达,并减少HOP的产生,呈剂量依赖关系。而拆方组中的益肾方与益肾化瘀方相比,其抑制成纤维细胞增殖及相关机制的效应差异较低,差异显著(P<0.05)；拆方组中的化瘀方与益肾化瘀方相比,其抑制成纤维细胞增殖及相关机制的效应亦显著较低,其差异也具有显著性,(P<0.05),但化瘀方比益肾方抑制成纤维细胞增殖的效应佳。HA表达量各干预组显著下降。与空白组相比,各干预组均抑制HA表达,差异非常显著(P<0.01),较之益肾化瘀组,益肾组及化瘀组抑制作用弱,差异非常显著(P<0.01)。各干预组Ⅲ型胶原蛋白表达显著下降。与空白组相比,各干预组均非常显著抑制HA表达(P<0.01),但较之益肾化瘀组,益肾组及化瘀组抑制作用弱,具有非常显著差异(P<0.01)。采用比较2-△△Q法分析细胞Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达量：即以管家基因β-actin作为内参基因相对定量,以空白组细胞作为对照组,计算各组Ⅲ型胶原蛋白mRNA的△△Ct值。目的基因的量=2-△△Ct。结果发现,与空白组比较,干预各组Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达有非常显著降低趋势(P<0.01),益肾化瘀组最低。α-SMA及STAT6的蛋白水平组间均存在显著性差异。α-SMA蛋白：与正常组相比,益肾化瘀组、益肾组及化瘀组三组该蛋白表达显著下降(P<0.01),合方组与拆方组间两两比较,皆有显著性差异(P<0.01)。STAT6蛋白：与正常组相比,益肾化瘀组、益肾组及化瘀组三组该蛋白表达显著下降(P<0.01),而合方组与拆方组间两两比较,皆有非常显著差异(P<0.01)。结论：益肾化瘀法具有显著抑制盆腔炎性疾病后遗症过程中成纤维细胞增殖的效应,其机制是通过抑制成纤维细胞增殖相关细胞因子的表达及抑制细胞外基质相关胶原蛋白的表达实现的。与益肾法、化瘀法相比,益肾化瘀合用方的效应最优,差异最显著。
【作者】殷燕云；
【导师】周春祥；
【作者基本信息】南京中医药大学，中医临床基础，2014，博士
【关键词】益肾化瘀；盆腔炎性疾病后遗症；成纤维细胞；增殖；

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