安神定志灵对ADHD模型动物多巴胺及cAMP/PKA信号通路的干预研究

【摘要】第一部分中医药动物实验方法学研究目的：评估中医药对ADHD动物实验研究的质量及方法学设计,对其中存在的问题进行探讨分析,希望能有效推动中医药动物实验规范化,充分发挥实验动物在ADHD中医药研究中的作用。方法：本研究对Pubmed和中国知网、VIP和万方数据库进行文献检索,检索时间自各数据库建库截止到2013年6月。全面搜集中医药治疗ADHD动物模型的实验研究,中文检索主题词为“注意力缺陷多动障碍”或“多动”或“注意缺陷”或“轻微脑功能障碍”,“中医”或“中医药”,“大鼠”或“小鼠”或“实验”；英文检索主题词为‘’ADHDorhyperactivityorattentiondeficitorminimalbraindysfunction”,”Chinesemedicine”,”ratsormouseorexperiment”。结合动物实验研究报告指南(AnimalResearch:ReportingInVivoExperimentGuidelines,ARRIVE)和动物实验金标准报告清单(GoldStandardPublicationChecklist,GSPC),对所有纳入文献进行数据提取及系统评价。结果：经文献检索、筛选、去重等过程,本研究纳入34篇文献,其中31篇文献为中国研究人员发表,另外3篇由韩国研究人员发表；第一篇中医药动物实验发表于1991年,大部分文献(27/34)发表于近五年中。30篇文献发表在中文期刊上,另外4篇发表在英文期刊上。大部分研究报道了中医药治疗ADHD动物模型行为学和/或分子生物学标记物(如多巴胺系统)的阳性结果,但是,在研究的实验设计、方法学和文献报告方法上仍有存在明显不足。结论：尽管中医药治疗ADHD临床疗效明显,但是ADHD中医药动物实验中薄弱的方法学及文献报告质量使其研究结果需要谨慎地解读；需要在以后的研究中,改进实验设计及方法学质量,同时提高研究报告规范标准。第二部分安神定志灵对ADHD模型动物的实验研究目的：研究安神定志灵对注意力缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠行为学影响,及探讨其对脑组织中多巴胺及cAMP/PKA信号通路的调控作用。方法：SHR大鼠45只,随机分为5组：模型组、MPH(2mg/kg/day)组、黄芩素组(200mg/kg/day)、安神定志灵中剂量组(4.78g/kg/day)、安神定志灵高剂量组(9.56g/kg/day),另设9只WKY/NHsd大鼠作为正常对照组。连续给药5周,正常组、模型组每天灌服羧甲基纤维素钠溶液(溶媒,3ml/kg/day),其他各组分别按照已设置剂量灌服相应药物。分别量取大鼠每天体重及摄食量；运用开场实验、高架十字迷宫、Barnes迷宫、新颖物体熟悉及识别实验观察大鼠自发性行为、焦虑、空间学习及记忆功能等行为学变化。停药两周后,采集大鼠前额叶皮质及纹状体,运用酶联免疫吸附法测定大鼠前额叶皮质及纹状体中多巴胺、多巴胺转运体、环磷酸腺苷(cyclicAdenosineMonophosphate,cAMP)水平,蛋白印迹法测定前额叶皮质中PKA水平。结果：(1)安神定志灵对SHR大鼠的摄食量、体重没有影响；黄芩素、利他林也分别表现出同样的效果。(2)安神定志灵在治疗结束时及停药后均能减少SHR大鼠的自发活动,其中以安神定志灵中剂量组疗效最为显著。(3)安神定志灵存在改善大鼠焦虑行为的趋势,但没有显著性意义。利他林对大鼠的焦虑行为具有明显改善。(4)安神定志灵中剂量组与MPH可以改善SHR大鼠识别记忆功能。(5)安神定志灵中、高剂量组与黄芩素素组大鼠有改善SHR大鼠空间学习及记忆的趋势,但疗效不显著；MPH能改善SHR大鼠短期空间学习及记忆功能,安神定志灵高剂量改善SHR大鼠长期空间学习及记忆功能,MPH、安神定志灵中剂量、黄芩素有改善SHR大鼠长期空间学习及记忆的趋势。(6)安神定志灵中高剂量能促进前额叶皮质中DA含量增高,可能与其能降低纹状体内多巴胺转运体的水平有关。(7)安神定志灵停药两周后,仍能提高PFC及纹状体中cAMP/PKA含量。结论：安神定志灵不影响SHR大鼠体格发育,能减少大鼠自发活动,不同程度改善大鼠的空间学习与记忆功能、识别记忆功能,停药两周后仍能降低纹状体内多巴胺转运体,提高纹状体及前额叶皮质的DA含量；进一步通过调控多巴胺受体后cAMP/PKA信号通路。第三部分中医药临床文献研究目的：评价中医药治疗ADHD的主要方式—口服剂型的中医药复方单用或与MPH联用治疗ADHD患儿的临床有效性及安全性。方法：本研究对Pubmed和中国知网、VIP和万方数据库进行文献检索,语种限于英语及汉语,检索时间自各数据库建库截止到2013年7月。全面搜集中医药治疗ADHD的随机对照临床试验,英文数据库采用以下关键词或主题词：ADHDorhyperactivityorattentiondeficitorminimalbraindysfunction,CHM,MPH,clinicaltrial;中文数据库采用以下关键词：注意缺陷或多动或轻微脑功能障碍,中医药,哌醋甲酯或利他林,治疗。治疗组采用口服剂型的中医药复方单用或与MPH联用,对照组单用MPH。主要疗效指标为Conners多动指数(ConnersIndexofHyperactivity,CIH)和临床总有效率,采用Statal2.0软件进行数据分析。结果：1.纳入研究基本情况：共54篇文献纳入研究,中医药组2077例患者,中医药联合MPH组584例,单纯MPH组2123例。治疗周期由1.4周到26周,大部分为12或13周。纳入研究中采用了39种中医复方(包含90味单味中药)。2.方法学质量：纳入研究的方法学质量较低。3.研究结果：1)Conners多动指数(CIH)：在疗程结束时,中医药组与MPH组无显著统计学差异[合并SMD=-0.00,95%CI(-0.08,-0.08),P=0.870],中医药联用MPH组优于MPH组[合并SMD=-1.24,95%CI(-1.42,-1.06),P=0.00].2)临床总有效率：按照界定总有效率所依据的多动指数减分率等进行亚组分析,然后进行汇总分析,中医药组及中医药联用MPH组疗效在疗程结束时均优于MPH[合并OR=1.24,95%CI(1.05,1.47);合并OR=3.00,95%CI(2.22,4.05)].3)中医证候疗效：中医药组在改善中医证候方面优于MPH组[合并OR=4.72,95%CI(2.64,8.45),P=0.00]。4)神经系统软体征：中医药与MPH对翻手试验的疗效无差异[合并OR=0.97,95%CI(0.62,1.52),P=0.906];中医药联用MPH组优于MPH组[合并OR=4.92,95%CI(2.12,8.65),P=0.000]。中医药与MPH对对指试验疗效无差异[合并OR=0.95,95%CI(0.56,1.63),P=0.858];中医药联用MPH组优于MPH组[合并OR=4.80,95%CI(2.31,9.99),P=0.000]。中医药与MPH对指鼻试验的疗效无差异[合并OR=0.87,95%CI(0.39,1.95),P=0.739]。5)其它指标：中医药与MPH对数字划消试验划消净分、脑电图异常及血清锌元素水平疗效无差异；中医药组和中医药联合MPH组对SNAP-Ⅳ评定量表评分、中文版韦氏儿童智力量表中IQ及C因子、整合视听连续执行测试等均有不同程度改善,但因纳入研究较少,仅进行描述性分析。6)安全性评价：中医药组和中医药联合MPH组16种常见的不良反应明显少于MPH,或与MPH无差异。结论：中医药和中医药联合MPH治疗ADHD比西医MPH在临床有效性及安全性方面更具有优势,但基于中医药临床试验设计方法及方法学上的异质性及不规范,建议进行更多大样本、多中心的随机对照临床试验予以进一步加以证实；同时制订符合国际学术界认可,同时又具备中医特色的ADHD临床诊断及治疗模式。
【作者】倪新强；
【导师】韩新民；
【作者基本信息】南京中医药大学，中医儿科学，2013，博士
【关键词】中医药；注意力缺陷多动障碍；动物实验；方法学；规范；安神定志灵；行为学；cAMP/PKA；SHR大鼠；哌醋甲酯；临床疗效与安全性；Meta-分析；

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