【摘要】目的：利用免疫共沉淀-偶联质谱技术筛选和鉴定能被结核病患者血清免疫球蛋白G(IgG)特异识别的结核分枝杆菌抗原,以DNA重组技术表达筛选的血清学抗原热休克蛋白16.3(Hsp16.3),酶联免疫吸附试验分析其诊断结核病的价值,以期为结核病的血清学诊断提供科学依据。方法：(1)于罗氏培养基中培养结核分枝杆菌H37Rv标准菌4周,收集菌体,冰浴超声法提取结核分枝杆菌菌体抗原；饱和硫酸铵分级沉淀 […]

【摘要】Argonaute（AGO）蛋白免疫沉淀法分离和鉴定miRNA靶基因已成为miRNA靶基因的规模化鉴定的重要方法。AGO蛋白是RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC）的核心催化元件，能够与小RNA结合并且在小RNA的指导下结合靶基因，进步剪切或抑制靶基因的表达。前期研究我们通过免疫共沉淀方法分离了BmAGO2结合RNA中50nt以下的小RNA […]

【摘要】热休克蛋白(Heatstressprotein,HSP)是一类广泛存在各种生物中的蛋白质,是生物体或细胞在受到不良刺激时高效表达的一类蛋白。热休克蛋白不仅在应激条件下高表达,在正常情况下的组织中也广泛存在。随着家蚕(Bombyxmori)基因组测序的完成,家蚕小分子热休克蛋白(smallHSP,sHSP)的研究也有了许多新进展。目前对家蚕sHSP功能的研究甚少。家蚕热休克蛋白基因BmHSP […]

【摘要】由HDACs和HATs介导的组蛋白乙酰化异常是导致肿瘤产生的主要原因之一。本文意在通过构建真核细胞中表达的重组质粒pGBKT7-HDACl，在酵母双杂交系统中筛选HeLa基因组cDNA文库中与组蛋白去乙酰化酶1(HDACl)相互作用的蛋白，为更好地寻找治疗癌症的药物靶标打下基础。从癌HeLa细胞中用Trizol一步法提取总RNA，用Invitrogen反转录试剂盒进行反转录合成cDNA，利 […]

【摘要】第一部分Beclin1基因的选择性剪接研究目的：研究儿童急性B淋巴细胞白血病697细胞系中的Beclin1基因的选择性剪接及其对自噬的调控作用。方法：（1）提取697细胞系的总RNA，逆转录成cDNA。（2）在Beclin1基因的ORF区的起始密码子上游和终止子的下游设计引物，以cDNA为模板，进行PCR扩增、测序和比对。（3）分析剪接体Del-E11产生的分子机制。（4）构建GFP-剪接 […]

【摘要】14-3-3蛋白质家族是一个在真核生物中广泛表达的28-33kDa的酸性蛋白质。从酵母到哺乳动物细胞都有14-3-3蛋白质的表达,并且结构和功能非常保守。在哺乳动物中有7个14-3-3亚型(isoform),分别是β、γ、δ、η、σT和ζ,各个亚型由不同的基因编码。目前已报道有超过100个蛋白质与14-3-3相互作用,这些与14-3-3相互作用的蛋白质涉及到的生物学功能包括细胞周期调控、信 […]

【摘要】小麦病毒病是全球冬小麦产区小麦上经常发生的一类重要病害，由黄矮病毒（yellowdwarfviruses，YDVs）单一侵染或混合侵染引起。黄矮病毒经由多种麦蚜以持久型方式传播。病毒-蚜虫的互作关系成为病毒-蚜虫-小麦这一病害体系中的关键因素。病毒编码的蚜传相关蛋白和蚜虫体内参与病毒传播的蛋白之间的互作是病毒-蚜虫互作关系的分子证据，而参与传播黄矮病毒相关的蚜虫蛋白都停留在正向遗传学手段的 […]

【摘要】研究背景：绵羊肺腺瘤(Ovinepulmonaryadenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiektesheepretrovirus,JSRV)引起的一种传染性肺脏肿瘤性疾病。JSRV为p反转录病毒属成员,其env基因主要编码囊膜蛋白(JSRV-Env),包括表面蛋白(SU)和穿膜蛋白(TM)两个亚基。有研究表明,绵羊透明质酸酶2(hyaluronidase2,Hya […]

【摘要】尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGTs是一类非常重要的二相代谢酶,可以在内源物和外源物分子上加入一个葡萄糖醛酸,增加极性,利于其经尿液与胆汁排泄,从而调节体内稳态。UGTs的单核苷酸多态性SNP广泛存在,可能引起一些内源性或外源性物质代谢行为的改变,从而引起各种疾病,如遗传性非结合性高胆红素血症(Gilbert综合征)就是由于患者的UGT1A1基因突变引起的。UGT1A和UGT2B成员间的相互 […]

【摘要】第一部分pIRES2-ZsGreen1-TRIM29载体构建目的：构建pIRES2-ZsGreen1-TRIM29质粒表达载体方法：以pDONR223-TRIM29为基因模板,PCR扩增TRIM29CDS区片段,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,并回收TRIM29条带。用BglⅡ、EcoRI将回收的TRIM29的PCR片段及目的载体pIRES2-ZsGreenl双酶切,然后进行连接。将重组质 […]